腸梗阻大鼠空腸組織腐胺的測(cè)定與腸炎寧的作用.pdf

1、目的：
　　建立相對(duì)簡便、快速的腐胺測(cè)定方法，定量測(cè)定生物樣品中腐胺的含量。觀測(cè)腸炎寧對(duì)單純性粘連性腸梗阻大鼠腸組織形態(tài)學(xué)變化和腐胺水平的影響，探討其對(duì)單純性腸梗阻的作用。
　　方法：
　　1.模型制備
　　將健康SD大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(正常組)、腸梗阻模型對(duì)照組(模型組)，頭孢克肟陽性藥物對(duì)照組(頭孢克肟組)、腸炎寧治療組(腸炎寧組)。將四組大鼠禁食12小時(shí)，不禁水，腹腔注射10％水合氯醛進(jìn)行麻

2、醉。將大鼠固定，脫毛，消毒，鋪無菌紗布，上腹部正中切2 cm切口，分離空腸，后三組每隔5 mm用有齒鑷夾傷腸管，送回腹腔，正常對(duì)照組(亦即假手術(shù)組)手術(shù)過程與模型組大致相同，只是開腹后不鉗夾，逐層縫合，再消毒。將四組大鼠于術(shù)后第一天早晨起分別給予生理鹽水、生理鹽水、等容量頭孢克肟（3.2 mg·mL-1）和腸炎寧（0.1075 g·mL-1）灌胃，灌胃體積皆為10 mL·kg-1，每日一次，連續(xù)七天。
　　2. HPLC法測(cè)定大鼠

3、腸組織中腐胺水平
　　正常組和模型組各15只大鼠，于第七天灌胃給藥后3 h處死。頭孢克肟組和腸炎寧組分別于第七天灌胃給藥后的3、6、12、24 h各處死6只。取空腸組織樣品，先后加入5-磷酸吡哆醛酶提取液和鳥氨酸鹽酸鹽使其反應(yīng)產(chǎn)生腐胺。以苯甲酰氯對(duì)腐胺進(jìn)行柱前衍生，采用高效液相色譜法測(cè)定各組大鼠腸組織腐胺濃度。
　　3.腸炎寧對(duì)粘連性腸梗阻大鼠的作用
　　另取正常組、模型組、頭孢克肟組及腸炎寧組大鼠，每組各15只。分別

4、進(jìn)行動(dòng)物一般狀況觀察；腸組織大體觀察，按Phyllips分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)粘連程度進(jìn)行分級(jí)；HE染色，光鏡下空腸組織形態(tài)學(xué)觀察，評(píng)價(jià)腸炎寧的作用。
　　4.統(tǒng)計(jì)方法：等級(jí)資料采用 Ridit分析；定量資料方差齊性時(shí)用單因素方差分析，方差不齊時(shí)用非參數(shù)檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　1.單純粘連性腸梗阻模型造模成功：正常組大鼠，飲食、排便如常，體重增加。模型組大鼠術(shù)后食欲差，不排便，活動(dòng)少，體重降低，毛發(fā)稀疏，可見腹形，開腹后有廣泛粘連

5、，分離困難、出血多。
　　2.建立柱前衍生-HPLC法測(cè)定腸組織中腐胺的含量，以C18柱作為色譜柱，采用甲醇:水（60:40）為流動(dòng)相；紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長為232 nm；檢測(cè)靈敏度為0.002（AUFS）。該法簡單、可靠，適合生物樣品中腐胺的測(cè)定。
　　腐胺變化：最后一次用藥后，頭孢克肟組腐胺水平逐漸降低；腸炎寧組用藥3h后腐胺降低的幅度較大，且6h時(shí)的腐胺水平低于頭孢克肟組，但個(gè)別時(shí)間點(diǎn)較之前的臨近時(shí)間點(diǎn)腐胺水平有輕度回升

6、，觀察終點(diǎn)上腸炎寧組與頭孢克肟組腐胺水平無顯著性差異,并且與模型組進(jìn)行比較，在用藥七天后同時(shí)間點(diǎn)的用藥各組腐胺水平均較模型組明顯減低。
　　3.腸炎寧對(duì)單純性粘連性腸梗阻大鼠的作用
　　動(dòng)物一般狀況觀察：正常組：飲食、排便正常，體重增加；模型組：術(shù)后不思飲食，不排便，精神萎靡，毛發(fā)不榮，體重減輕，可見腹形；頭孢克肟組：術(shù)后食欲不振，不排便，給藥后排便短、小、細(xì)，體重緩慢增加；腸炎寧組：術(shù)后食欲不佳，不排便，給藥后飲食逐漸增多

7、，排便增加，體重緩慢回升。
　　腸組織大體觀察：正常組：腸組織未見異常改變，無腸粘連等改變；模型組：有廣泛粘連，分離困難、分離時(shí)出血較多，以3級(jí)和4級(jí)粘連居多；頭孢克肟組：粘連面積多數(shù)未超過創(chuàng)面百分之二十，以2級(jí)居多；腸炎寧組：粘連面積多數(shù)未超過創(chuàng)面百分之十，用手指可分離，分離時(shí)無出血。
　　光鏡下觀察：各組大鼠空腸腸壁結(jié)構(gòu)清晰，形態(tài)正常。正常組：腸絨毛規(guī)整，未見破壞、水腫，偶見炎細(xì)胞浸潤。模型組：腸絨毛變短、不規(guī)則，小腸腺

8、增多，可見較多潘氏細(xì)胞，杯狀細(xì)胞增多，間質(zhì)急、慢性炎細(xì)胞浸潤，伴纖維組織增生。頭孢克肟組：腸絨毛明顯增粗，部分融合，杯狀細(xì)胞增多，可見散在淋巴小結(jié)，間質(zhì)炎細(xì)胞減少，纖維組織明顯增生。腸炎寧組：腸絨毛增粗，變長，部分融合，小腸腺形態(tài)較好，呈長指狀，杯狀細(xì)胞增多，間質(zhì)炎細(xì)胞減少，纖維組織明顯增生。
　　結(jié)論：
　　1.成功建立測(cè)定生物樣品中腐胺含量的柱前衍生-HPLC法。該方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好。適用于生物樣品中腐胺的測(cè)定。<