針刺內(nèi)關(guān)穴調(diào)節(jié)延髓NO-NOS系統(tǒng)及其有關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)改善大鼠心肌缺血作用機(jī)制探討.pdf

1、目的:觀察急性心肌缺血(AMI)大鼠模型心功能、心肌梗死面積的變化及針刺內(nèi)關(guān)穴(Pe6)對(duì)急性心肌缺血的改善作用。通過(guò)檢測(cè)急性心肌缺血和針刺組大鼠心血管調(diào)節(jié)中樞延髓頭端腹外側(cè)區(qū)(RVLM)一氧化氮/一氧化氮合酶(NO/NOS)含量及分布變化,以及該部位相關(guān)氨基酸遞質(zhì)改變,探討針刺與中樞NO/NOS及其氨基酸遞質(zhì)在RVLM對(duì)AMI大鼠血壓和心功能的調(diào)節(jié)作用。進(jìn)而探究針刺改善AMI的中樞機(jī)制和意義。
　　 方法:通過(guò)冠狀動(dòng)脈左前降支

2、結(jié)扎手術(shù)制備AMI大鼠模型;采用針刺大鼠雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴位觀察針刺改善心肌缺血作用,同時(shí)監(jiān)測(cè)心率(HR),平均動(dòng)脈壓(MAP),心室內(nèi)壓(IVP);采用氯化四唑(TTC)染色檢測(cè)梗死心肌面積以及蘇木精和伊紅(眥)染色觀察梗死心肌組織形態(tài):采用放射免疫法(RIA)測(cè)定急性心肌缺血大鼠血漿去甲腎上腺素(NE)和腦鈉肽(BNP)的含量:采用熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Realtime-PCR)、免疫組織化學(xué)(IHC)等方法,觀察AMI大鼠RVLM神經(jīng)元

3、型一氧化氮合酶(nNOS)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的表達(dá)變化;應(yīng)用中樞核團(tuán)微量注射方法觀察NO及NOS抑制劑在RVLM對(duì)針刺作用的影響以及NO/NOS在對(duì)AMI大鼠血壓和心功能的調(diào)節(jié)作用;采用微透析結(jié)合高效液相色譜一熒光檢測(cè)研究參與上述過(guò)程的氨基酸遞質(zhì)的改變。
　　 結(jié)果:(1)冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎后,大鼠立即出現(xiàn)心電圖S-T段抬高,結(jié)扎線遠(yuǎn)端心肌發(fā)白,運(yùn)動(dòng)減弱,說(shuō)明AMI模型制各成功。冠脈結(jié)扎術(shù)后5天,TTC及HE染色

4、顯示AMI后壞死的心肌組織,心梗組大鼠外周血液中腦鈉肽(BNP),去甲腎上腺素(NE)水平較假手術(shù)組升高;(2)針刺AMI大鼠內(nèi)關(guān)穴20min,連續(xù)5天,可以降低AMI大鼠心肌梗死面積及血液中BNP和NE的水平;(3)針刺組大鼠HR,MAP下降,其它各項(xiàng)心功能指標(biāo)均有明顯改善,包括LVSP,-dp/dt,.+dp/dt和LVEDP下降;(4)若電針前于RVLM微量注射N(xiāo)OS非選擇性抑制劑左旋硝基精氨酸甲基酯(L-NAME15nmol/1

5、00nl),或者iNOS抑制劑氨基胍(AG,250pmol/100nl)或者nNNOS抑制劑7-硝基吲唑(7-NI,5pmol/100nl),除HR和MAP外,電針改善AMI心功能的作用被取消或減弱;(5)Realtime-PCR結(jié)果表明:正常wistar大鼠iNOS與nNOS在RVLM均有表達(dá)。與對(duì)照組假手術(shù)相比,AMI大鼠RVLM區(qū)nNOSmRNA表達(dá)明顯增加而iNOSmRNA的表達(dá)減少;(6)IHC結(jié)果顯示,在延髓,nNOS和iN

6、OS陽(yáng)性神經(jīng)元主要分布在RVLM、中縫核、巨細(xì)胞旁外側(cè)核背側(cè)部。舌下神經(jīng)核和下橄欖核等處也有陽(yáng)性細(xì)胞分布。AMI大鼠RVLM的nNOS陽(yáng)性細(xì)胞明顯多于對(duì)照大鼠,而iNOS陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯降低,針刺治療可以降低AMI大鼠nNOS陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),升高其iNOS陽(yáng)性細(xì)胞數(shù);(7)在正常和AMI大鼠,微量注射N(xiāo)O供體L-精氨酸(L-arginine50nmol,100nmol/100n1)至RVLM能夠在上述2組大鼠產(chǎn)生明顯的MAP和HR降低,MAP

7、呈現(xiàn)劑量依賴性降低并且在AMI大鼠更明顯。RVLM注射N(xiāo)OS非選擇性抑制劑L-NAME(15nmol/100nl)能夠升高血壓加快心率。RVLM注射AG(250pmol/100nl)能夠產(chǎn)生與L-NAME類(lèi)似效應(yīng),血壓升高,心率明顯加快。與此相反,7-NI(5pmol/100nl)能夠降低血壓和心率(8)在引起血壓心率變化的同時(shí),在RVLM注射AG后第一,二個(gè)10minRVLM透析液中抑制性氨基酸(IAA)γ-氨基丁酸(GABA),?；?/p>

8、酸(Tau)釋放減少而興奮性氨基酸(EAA)天門(mén)冬氨酸(Asp)釋放增加:在RVLM注射7-NI后第一,二個(gè)10min可見(jiàn)RVLM透析液中EAA谷氨酸(Glu)釋放減少I(mǎi)AA甘氨酸(Gly)和牛磺酸(Tau)釋放增多;(9)AMI大鼠RVLM透析液中EAA:Glu,Asp釋放增多而IAA:GABA和Tau釋放減少。針刺可以減少Glu,而增加GABA和Tau的釋放。
　　 結(jié)論:(1)采用結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支(LAD)的方法,

9、能成功造成AMI大鼠模型,該模型大鼠外周交感活性增高伴隨心功能各項(xiàng)指標(biāo)減弱。(2)針刺AMI組大鼠內(nèi)關(guān)穴,可以降低交感活性,改善大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo),改善心功能。NOS抑制劑能夠部分取消針刺改善心功能的效應(yīng),說(shuō)明這種效應(yīng)可能與NO介導(dǎo)有關(guān)。(3)針刺內(nèi)關(guān)穴可以調(diào)節(jié)nNOS和iNOS在RVLM內(nèi)表達(dá)量,同時(shí)可以減少AMI大鼠RVLM區(qū)EAA遞質(zhì)GLU釋放,而增加IAAGABA和Tau釋放,這可能與針刺降低AMI大鼠中樞交感活性有關(guān)。(4)N

10、O在RVLM能降低正常大鼠及AMI大鼠升高的血壓和心率,在AMI大鼠上效果更明顯。(5)nNOS來(lái)源的N0在RVLM能促進(jìn)興奮性GLU釋放,而抑制性Gly,Tau釋放減少而發(fā)揮其升壓和加快心率的效應(yīng),而iNOS來(lái)源的NO在RVLM主要通過(guò)增加IAA遞質(zhì)GABA,Tau和減少EAAAsp發(fā)揮其降壓和減慢心率的作用。(6)針刺改善大鼠AMI作用的中樞機(jī)制之一可能是在RVLM通過(guò)增加iNOS和減少nNOS的表達(dá)而影響NO的生成,從而調(diào)節(jié)興奮性