Perlecan在大鼠牙囊發(fā)育過程中的表達及意義.pdf

1、牙囊的發(fā)育是一個非常復雜的過程，從胚胎期一直延續(xù)到出生以后，其間要經過開始發(fā)育、增殖、形態(tài)分化、基質沉積、成熟等階段，最后才能形成牙周組織[1]。牙囊的發(fā)育和分化與細胞外基質(extracellular matrix,ECM)、生長因子和基底膜等因素非常密切?；啄ぶ饕鹬Ъ茏饔?，ECM和生長因子附著于基底膜，生長因子作為誘導信號(inductivesignal)在上皮和間充質之間的相互作用中起著重要作用。ECM在細胞的粘附、擴散及移行

2、方面意義深遠。串珠素(perlecan)作為重要的ECM蛋白，由核心蛋白和4 條硫酸肝素(heperinsulfate, HS)側鏈組成，與成纖維細胞生長因子(fibroblastgrowth factor, FGF)等生長因子關系密切，在組織的發(fā)育過程中具有重要的意義。因為其分子結構呈串珠狀，1991 年Hassell等將其命名為perlecan。 Perlecan作為ECM中的主要蛋白聚糖之一，可以作為一種穩(wěn)定基質結構和細胞

3、-基質相互作用的粘合劑，并介導生長因子信號對細胞增生和分化起作用，顯示出結合基底膜蛋白的活性。其在骨、血管等器官發(fā)育過程中的作用已有報道。在牙囊發(fā)育過程中，perlecan是否有表達，還未見相關研究報道[2]。 本實驗采用出生后0 天、1 天、1 周、2 周的SD 大鼠各10 只，在腹腔麻醉下取其下頜第一磨牙及其牙囊組織，并制作標本，運用免疫組化、灰度測量等方法，觀察perlecan 在牙囊各發(fā)育時間段的表達。結果顯示，出生后各

4、時間組大鼠牙囊組織中perlecan 均為陽性表達，主要分布在細胞周圍的基質中。出生0 天，成釉器與牙乳頭間的基底膜、內釉和外釉上皮呈陽性表達，牙囊組織有陽性信號；出生1 天，成釉器進一步發(fā)育，基底膜、外釉、牙囊、牙乳頭細胞均有陽性表達；出生1 周，內釉上皮細胞開始分化為成釉細胞，牙本質細胞尚未形成，成釉細胞、牙囊細胞呈陽性表達；出生后2 周，釉基質、牙本質已形成，牙囊組織開始形成牙骨質、牙槽骨，成釉細胞呈陽性表達。灰度測量結果采用重復

5、測量的方差分析。 分析結果表明，1 天組、1 周組分別與0 天組、2 周組有明顯差別(P<0.05)；而1 天組、1 周組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；0 天、2 周之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 運用熒光雙標perlecan 與堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblaastgeowth factor, bFGF)，在激光掃描共聚焦顯微鏡(1aser scanning confocalmicrosco

6、pe, LSCM)下觀察perlecan 與bFGF 在牙囊組織發(fā)育過程中的分布，perlecan 與bFGF 在大鼠牙囊發(fā)育過程中呈先后不同時相的表達，染色主要為牙囊細胞（鐘狀晚期）及牙骨質牙槽骨內側（硬組織形成期）。Perlecan主要分布在牙囊細胞周圍基質中，在造釉器中高度表達，牙囊細胞的高表達區(qū)主要集中在小血管周圍；bFGF 在牙囊細胞內外均有表達，在硬組織形成期， bFGF 的高表達區(qū)主要集中在牙骨質和牙槽骨。0 天組、1 天

7、組、1周組perlecan 陽性表達程度逐漸增強，perlecan 的陽性程度表達高于bFGF；2 周組perlecan 陽性表達程度有所下降，bFGF 的陽性程度表達高于perlecan；0 天組、1 天組、1 周組、2 周組bFGF 陽性表達程度逐漸增強。 實驗結論： 1. 完成了對bPerlecan 基因的正確克隆和表達，建立了可以表達bPerlecan的組織工程菌。 2. Perlecan 與牙囊的發(fā)育有