中性氨基酸轉(zhuǎn)運蛋白SNAT2拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)初探.pdf

1、】Ⅵa s t e r ：D i S s e r t a t i o nT o p o l o g ys t r u c t u r eo f n e u t r a la m i n o a c i dt r a n s p o r t e r S N A T 2L i Y a n gD i r e c t e db yP r o f ．Z h a n g Z h o uC o U e g e o f L i f ea n d E n

2、 V i r o n m e n t S c i e n c e s ，S h a n g h a i N o r m a l U n i V e r s i 坶A p r i l 2 0 1 3刪為本實驗室已構(gòu)建獲得的載體，N 端載體礎(chǔ)犯C 膨y 礎(chǔ)．S M 刀采用酶切連接的方法獲得j 并通過雙酶切鑒定、D N A 測序確定其正確構(gòu)建，同時采用W b s t e m B 1 0 t 方法確定H A ．S N A T 2 能夠正常表達。

3、應(yīng)用免疫熒光的方法通過A l e x aF l u o r 標(biāo)記的H A 熒光一抗檢測S N A T 2 的N 端和C 端的定位。結(jié)果表明S N A T 2的N 端位于膜外而C 端位于膜內(nèi)，與以前的報道不同?！浯问菍μ腔稽c的確定。已有的文獻預(yù)測了S N A T 2 的兩個N 糖基化位點即N 2 5 8 和N 2 7 2 。我們采用定點突變的方法將S N A T 2 分子中2 5 8 和2 7 2 位的谷氨酰胺突變成天冬酰胺( N

4、2 5 8 Q 、N 2 7 2 Q 和N 2 5 8 Q ＆N 2 7 2 Q ) ，D N A 測序后進行W e s t 鋤B l o t ，結(jié)果顯示S N A T 2 蛋白發(fā)生突變后在S D S —P A G E 上的遷移率發(fā)生明顯改變，表明這兩個位點確為S N A T 2 的糖基化位點。但是無論單突變體還是雙突變體與經(jīng)過N ．糖苷酶P N G a S eF 消化后的S N A T 2 比較，在S D S ．P A G E 上的遷