亮葉蠟梅葉活性成分鑒定及抗炎功能研究.pdf

1、在中國南方地區(qū)，亮葉蠟梅（蠟梅科植物）的葉普遍被用于制作傳統(tǒng)涼茶，并具有廣泛的治療作用。亮葉蠟梅葉及其制品具有解表祛風(fēng)，清熱解毒的功效，可用于防治感冒和流行性感冒，還具有抗炎、減肥等的潛在功能。本文對(duì)亮葉蠟梅葉活性成分的提取工藝、成分及抗炎功能進(jìn)行了一系列的研究。主要研究內(nèi)容及結(jié)論如下:
　　(1)建立了精確測(cè)定亮葉蠟梅葉提取物中四種特征性成分含量的分析方法。利用紫外分光光度計(jì)確定了特征性成分標(biāo)準(zhǔn)品的最佳檢測(cè)波長。優(yōu)化了洗脫液的洗

2、脫梯度以使提取物中的化合物分離度更高。利用標(biāo)準(zhǔn)品和高效液相色譜，測(cè)定并繪制了四種標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
　　(2)亮葉蠟梅葉活性物質(zhì)提取工藝的優(yōu)化。利用可見分光光度法研究了不同濃度乙醇溶液提取得到的提取物對(duì)5-脂氧合酶的抑制作用。100％乙醇提取物對(duì)5-脂氧合酶活性的抑制力最強(qiáng)，抑制率19.07％。利用得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線，使用正交分析和主成分分析的方法研究了乙醇濃度、提取溫度和料液比對(duì)化合物得率的影響。結(jié)合炎癥相關(guān)酶的抑制試驗(yàn)、正交實(shí)驗(yàn)和

3、主成分分析來探究亮葉蠟梅葉中特征性化合物的提取工藝的改善和優(yōu)化，確定了相對(duì)最優(yōu)的提取工藝，即100％乙醇、40℃提取溫度和1∶20料液比。
　　(3)亮葉蠟梅葉提取物的成分鑒定。利用超高效液相色譜結(jié)合三重四級(jí)桿飛行時(shí)間高分辨率二級(jí)質(zhì)譜對(duì)葉提取物的活性成分進(jìn)行了鑒定。共鑒定出化合物47種，其中包括4種有機(jī)酸、7種酚酸類化合物、22種黃酮類化合物、4種香豆素類化合物、4種脂肪酸類化合物和6種其他化合物。其中槲皮素和山奈酚及其衍生物數(shù)量

4、較多，分別有7種和8種。鑒定出的化合物中離子豐度最高的化合物為山奈酚-3-O-β-D-蕓香糖苷。
　　(4)特征性化合物含量測(cè)定方法的驗(yàn)證。利用提取物、標(biāo)準(zhǔn)品和高效液相色譜對(duì)測(cè)定方法的精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和加樣回收率進(jìn)行了分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)儀器精密度良好，平行試驗(yàn)的結(jié)果受到的影響較小;穩(wěn)定性良好，樣品在21h之內(nèi)上樣均不會(huì)對(duì)數(shù)據(jù)產(chǎn)生較大影響;重復(fù)性良好;回收率良好。說明利用該方法測(cè)定特征性化合物的含量可以得到穩(wěn)定可靠的結(jié)果。

5、
　　(5)提取物活性成分的測(cè)定。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線和已確定的方法測(cè)定提取物中四種特征性化合物的含量。亮葉蠟梅葉提取物中東莨菪素、槲皮素、山奈酚、山奈酚-3-O-β-D-蕓香糖苷的含量分別為0.0825、0.0365、0.0438、5.0366mg/g葉干重。利用分光光度法測(cè)定提取物中的總黃酮含量，含量為60.73mg/g葉干重（蘆丁當(dāng)量）。
　　(6)亮葉蠟梅葉提取物的抗炎活性分析。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析提取物對(duì)于LPS誘導(dǎo)

6、的斑馬魚體內(nèi)的促炎細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定，提取物對(duì)IL-1β的表達(dá)沒有顯著的抑制作用，但可以顯著降低TNF-α，IL-6的mRNA表達(dá)。利用轉(zhuǎn)基因斑馬魚和熒光體式顯微鏡觀察提取物對(duì)LPS誘導(dǎo)下的斑馬魚體內(nèi)炎癥細(xì)胞（巨噬細(xì)胞和中心粒細(xì)胞）的遷移情況的影響。亮葉蠟梅葉提取物沒有表現(xiàn)出對(duì)巨噬細(xì)胞遷移的顯著影響，但強(qiáng)烈地抑制了斑馬魚體內(nèi)中性粒細(xì)胞的遷移。
　　亮葉蠟梅葉提取物可以作為具有抗炎特性的天然產(chǎn)物的來源，其可以通過抑制促