馬鞍藤產(chǎn)樹脂糖甙內(nèi)生真菌的篩選及發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、馬鞍藤是一種含有很多活性物質(zhì)的固沙植物和藥用植物，在環(huán)境綠化和醫(yī)藥方面有很好的利用價值。有很多研究通過化學方法從馬鞍藤中提取出了許多有用的物質(zhì)，其中樹脂糖甙作為番薯屬植物的特征化學成份，具有新穎的化學結構和多樣的生物活性，為新化合物的合成和新藥物的研制提供了很好的依據(jù)。本試驗從馬鞍藤中篩選出一株能產(chǎn)生樹脂糖甙的內(nèi)生真菌MJ8，鑒定出目標菌株并進行發(fā)酵條件的優(yōu)化來提高樹脂糖甙的產(chǎn)量。試驗結果如下：
　　1）采用組織分離法，從馬鞍藤的

2、莖和葉中分離出內(nèi)生真菌120株，然后通過搖瓶發(fā)酵對分離出的內(nèi)生菌進行篩選，將發(fā)酵液通過柱層析和蒸餾后采用薄層色譜法與標準品對照。最終篩選出一株內(nèi)生真菌MJ8可以產(chǎn)生樹脂糖甙。
　　2）首先通過形態(tài)學方法，觀察MJ8的菌落、菌絲和分生孢子形態(tài)，初步歸類為擬盤多毛孢屬真菌，然后運用分子生物學方法分析18S rDNA序列和ITS序列并構建系統(tǒng)發(fā)育樹，結果表明MJ8可能為一株新的擬盤多毛孢屬真菌。
　　3）首先通過單因素試驗確定發(fā)酵

3、的氮源、碳源和發(fā)酵時間，并確定PDB培養(yǎng)基內(nèi)部各種物質(zhì)的最佳條件，然后通過Plackett-Burman試驗篩選出對試驗結果有顯著影響的4個因子乳糖、硫酸銨、溫度和接種量，最后采用Box-Behnken試驗進行響應面分析確定了發(fā)酵的最佳條件為乳糖濃度40.200g/L，硫酸銨濃度13.800g/L，溫度31.8℃，接種量5％，硫酸亞鐵濃度0.010g/L，氯化鉀濃度2.000 g/L，硫酸鎂濃度0.500 g/L，磷酸氫二鉀2.000