核糖體大亞基蛋白L11的環(huán)狀區(qū)loop62在調(diào)控蛋白質(zhì)翻譯中的作用.pdf

1、在蛋白質(zhì)翻譯的過程中,能量產(chǎn)生于GTP水解成GDP并釋放無機(jī)Pi的過程。核糖體上存在一個(gè)GTPase-associated center(GAC)區(qū)域。GAC主要負(fù)責(zé)激活參與蛋白質(zhì)翻譯的GTP酶(translational GTPase,trGTPase)的GTP水解活性。GAC由三個(gè)重要的組件組成:23S rRNA上的sarcin-ricin loop(SRL),L10和L7/L12蛋白組成的stalk,23S rRNA的helix4

2、3144(H43/H44)及其結(jié)合的L11蛋白。L7/L12和L11的蛋白序列在原核生物中是高度保守的。
　　 L7/L12 stalk位于核糖體大亞基上,它由L10,L11和多拷貝的L7/L12組成。L7/L12在大腸桿菌中是4個(gè)拷貝數(shù),它的N端結(jié)構(gòu)域(NTD)錨定在23S rRNA上,并結(jié)合著L10。它的CTD伸展在核糖體的外面,招募trGTPase。
　　 L11蛋白由NTD和CTD組成,它的CTD結(jié)合在23S r

3、RNA的H43/H44上,C端結(jié)構(gòu)域(CTD)與NTD之間是一段柔性環(huán)狀結(jié)構(gòu),它的NTD結(jié)構(gòu)比較松散,可以在核糖體上來回?cái)[動(dòng)。trGTPase結(jié)合到核糖體上引起L11構(gòu)象的改變,使得L11-NTD與GAC上L7/L12蛋白相互接觸。L7/L12可以激活翻譯因子的GTP酶活性,L11通過構(gòu)象的改變像分子開關(guān)一樣控制與L7/L12的相互作用,從而調(diào)節(jié)trGTPase的功能。
　　 本文主要研究L11-NTD loop62對(duì)GTP水解

4、的影響以及在核糖體翻譯過程中發(fā)揮的作用。L11-NTD的loop62位是一段非常短而且具有柔性的loop,它的功能非常重要,在空間位置上和L12-CTD靠的很近,它是L11與L12相互作用的部位。Loop62位包括4個(gè)氨基酸:Y(酪氨酸)、A(丙氨酸)、D(天冬氨酸)和R(精氨酸)。這幾個(gè)氨基酸高度保守,尤其是天冬氨酸。我們對(duì)100p62位做了點(diǎn)突變,把酪氨酸、天冬氨酸和精氨酸分別突變成丙氨酸,把氨基酸的側(cè)鏈突變掉,發(fā)現(xiàn)突變體重構(gòu)的核糖