發(fā)光細(xì)菌活性調(diào)控及毒性檢測研究.pdf

1、目的：水生生物是評(píng)價(jià)環(huán)境污染物毒性及其健康風(fēng)險(xiǎn)的重要手段,通常采用魚、溞、藻和微生物作為指示生物,其中以發(fā)光細(xì)菌為代表的微生物方法相對(duì)簡便、快速和經(jīng)濟(jì)。然而,發(fā)光細(xì)菌活性的穩(wěn)定性是影響檢測質(zhì)量的重要問題。目前,可用方法有冷凍干燥法、連續(xù)培養(yǎng)法和細(xì)胞固定化技術(shù)。為了提高發(fā)光細(xì)菌毒性測定方法的穩(wěn)定性和靈敏度,本文研究發(fā)光細(xì)菌生物活性調(diào)控方法,為發(fā)光細(xì)菌在線應(yīng)用等提供支持。本文還采用發(fā)光細(xì)菌對(duì)水源水和景觀水進(jìn)行長期綜合毒性評(píng)價(jià),探討實(shí)際水體的

2、環(huán)境毒性基線。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)選擇常用的指示生物明亮發(fā)光桿菌和鰒魚發(fā)光桿菌為研究對(duì)象,研究真空冷凍干燥法制備凍干粉菌制劑的方法,通過發(fā)光細(xì)菌復(fù)蘇后活性的分析,探討冷凍過程中各種保護(hù)劑對(duì)發(fā)光細(xì)菌活性的影響。其次,研究5℃冷藏過程中發(fā)光細(xì)菌活性變化規(guī)律,通過比較各種冷藏復(fù)蘇方式的效果,優(yōu)化菌懸液添加劑配方。本文還比較NaC1、蔗糖等不同滲透壓調(diào)節(jié)液的情況下,發(fā)光細(xì)菌對(duì)Zn2+(ZnSO4·7H2O)、Cr6+(K2Cr2O7)和3

3、,5-二氯苯酚急性毒性檢測結(jié)果的差異。同時(shí),也研究有機(jī)助溶劑在發(fā)光細(xì)菌檢測難溶性有機(jī)毒性物質(zhì)時(shí)的效應(yīng)。在上述基礎(chǔ)上,檢測兩類水體水質(zhì)毒性,采用統(tǒng)計(jì)分析方法構(gòu)建上述水體毒性基線。
　　 結(jié)果：凍干粉制備實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示脫脂牛奶和糖醇類對(duì)發(fā)光細(xì)菌有很好的保藏效果,以1％NaC1、15%脫脂牛奶和6%蔗糖效果較佳。選用脫脂牛奶菌懸液冷藏復(fù)蘇方法對(duì)明亮發(fā)光桿菌和鰒魚發(fā)光桿菌進(jìn)行冷藏,7天后復(fù)蘇相對(duì)發(fā)光率約為92%。優(yōu)于新鮮菌液冷藏和凍干粉即

4、時(shí)復(fù)蘇冷藏(冷藏4天復(fù)蘇相對(duì)發(fā)光率小于60%)。蔗糖對(duì)發(fā)光細(xì)菌檢測重金屬的靈敏度有所提高,降低了對(duì)有機(jī)物檢測的靈敏度。以DMSO和乙醇對(duì)發(fā)光細(xì)菌生物毒性效應(yīng)EC10所對(duì)應(yīng)的濃度為投加的限量,所測得氯苯和正己烷的EC50值分別為0.047mg.L-1,0.050mg.L-1,不投加DMSO或乙醇時(shí),氯苯和正己烷的EC50值分別為0.037mg.L-1,0.048mg.L-1。飲用水源水毒性基線為99.4%～103.8%,預(yù)警限為91%;景

5、觀水毒性基線96.0%～102.1%,預(yù)警限為84%。
　　 結(jié)論：NaC1、脫脂牛奶和蔗糖構(gòu)成的復(fù)合保護(hù)劑提高發(fā)光細(xì)菌凍干粉保存時(shí)間,同時(shí)脫脂牛奶也能提高發(fā)光細(xì)菌懸液冷藏時(shí)的穩(wěn)定性。NaC1和蔗糖的復(fù)合滲透壓調(diào)節(jié)液可以提高發(fā)光細(xì)菌對(duì)重金屬的靈敏度。DSMO和乙醇助溶劑對(duì)提高氯苯或正己烷的檢測限作用甚小。研究表明,飲用水源水毒性基線為99.4%-103.8%,景觀水毒性基線96.0%-102.1%。表明發(fā)光細(xì)菌方法可以用于毒性基