人類腫瘤基因FP248和多聚組氨酸融合乙肝抗原SS1在畢赤氏酵母中的表達.pdf

1、本文對人類腫瘤基因FP248和多聚組氨酸融合乙肝抗原SS1在畢赤氏酵母中的表達分兩部分進行研究： 第一部分：FP248是一個新發(fā)現(xiàn)的人類腫瘤相關(guān)基因。本文使用畢赤氏酵母胞內(nèi)表達載體pPIC3.5k對FP248進行了克隆及表達。實驗結(jié)果表明，F(xiàn)P248能夠在畢赤氏酵母GS115胞內(nèi)得到表達，只是其表達量偏低并且呈不溶的包涵體形式。為便于純化，我們采取了優(yōu)化其基因序列編碼子以及去除起始密碼子前的polyA結(jié)構(gòu)以觀察其對表達水平的影響。

2、同時對發(fā)酵誘導條件進行了一系列的優(yōu)化措施，在沒有得到可溶性蛋白的情況下，使包涵體蛋白的表達量盡量提高。另外，最后對酵母包涵體的洗滌，變性，復性等作了一定的研究工作，以期為畢赤氏酵母表達系統(tǒng)的深入研究起到一定的指導作用。 第二部分：乙肝重組抗原SpreS1(簡稱SS1抗原)較S抗原有更強的免疫原性，可望有更好的臨床應用前景。為了便于表達產(chǎn)物的純化，本文研究了利用化學合成的寡聚核苷酸鏈和PCR擴增，在SS1基因的5’端和3’端分別融合

3、了6His-EK和6His的編碼序列，將其重組質(zhì)粒pPIC3.5k-6His-EK-SS1、pPIC3.5k-SS1-6His轉(zhuǎn)化導入畢赤氏酵母菌GS115中，篩選鑒定得到的重組酵母工程菌進行誘導培養(yǎng)，然后采用鎳離子柱(Ni-NTABasin)純化表達產(chǎn)物，純化的蛋白樣品經(jīng)ELISA效價測定、SDS-PAGE膠和WesternBlot分析，結(jié)果表明融合抗原6His-EK-SS1和SS1-6His在畢赤氏酵母中均能表達，純化的產(chǎn)物仍有免疫