通過(guò)UV-X角膜交聯(lián)機(jī)對(duì)兔眼角膜交聯(lián)的實(shí)驗(yàn)研究探討角膜交聯(lián)術(shù)對(duì)酶消化的抑制作用.pdf

1、第一部分UV-X角膜交聯(lián)機(jī)對(duì)兔眼角膜交聯(lián)效果的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：應(yīng)用UV-X角膜交聯(lián)機(jī)對(duì)兔眼角膜進(jìn)行角膜交聯(lián)及相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，驗(yàn)證該儀器的作用效果并作出評(píng)價(jià)，為下一步實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ)。
　　方法：10只（20眼）日本大耳白兔，1只為正常對(duì)照組，9只隨機(jī)取一眼為實(shí)驗(yàn)組，另一眼為對(duì)照組，雙眼均刮去角膜上皮，實(shí)驗(yàn)組去上皮后用UV-X角膜交聯(lián)機(jī)行交聯(lián)術(shù)；術(shù)后1天、3天、7天各取3只兔子處死，取雙眼角膜，并對(duì)取下的角膜組織作光鏡（HE染色

2、、VG染色）及電鏡觀察。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組每只眼睛都順利完成角膜交聯(lián)術(shù)。HE染色示交聯(lián)后角膜均有水腫、炎性反應(yīng)，但隨著時(shí)間增長(zhǎng)程度逐漸減輕，至術(shù)后第7天，角膜無(wú)明顯水腫、炎性反應(yīng)亦明顯減輕。對(duì)照組炎癥及水腫情況均較實(shí)驗(yàn)組輕，但其恢復(fù)較實(shí)驗(yàn)組慢。VG染色按照灰度差異將膠原纖維進(jìn)行定量分析示，實(shí)驗(yàn)組膠原纖維的密度明顯高于對(duì)照組，且經(jīng)過(guò)交聯(lián)的角膜靠近上皮層的纖維密度更高。電鏡示實(shí)驗(yàn)組術(shù)后角膜細(xì)胞稍腫脹，細(xì)胞間連接較緊密，纖維排列較整齊，

3、對(duì)照組細(xì)胞腫脹，內(nèi)容物除個(gè)別內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可見(jiàn)外其余溶解，細(xì)胞核增大，密度降低，膠原纖維間距增加。
　　結(jié)論：應(yīng)用UV-X角膜交聯(lián)機(jī)進(jìn)行角膜交聯(lián)術(shù)穩(wěn)定、安全、有效。經(jīng)過(guò)該儀器交聯(lián)過(guò)的角膜較未交聯(lián)過(guò)的角膜更厚，纖維排列更整齊、密集。
　　第二部分角膜交聯(lián)術(shù)對(duì)酶消化抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：對(duì)比觀察三種蛋白酶（胃蛋白酶、胰蛋白酶和膠原蛋白酶）對(duì)交聯(lián)和未交聯(lián)的兔眼角膜進(jìn)行消化，驗(yàn)證角膜交聯(lián)術(shù)對(duì)酶消化的抑制作用。
　　方法：

4、9只（18眼）日本大耳白兔，隨機(jī)分為3組（每組3只），隨機(jī)取一眼為實(shí)驗(yàn)組，另一眼為對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組行角膜交聯(lián)術(shù)，對(duì)照眼僅刮去角膜上皮，之后立即將兔子處死并取雙眼角膜，分別將取好的角膜放入配好的酶溶液中，并置于酶的最適溫度，觀察并記錄消化過(guò)程角膜的形態(tài)變化及角膜被完全消化所用的時(shí)間。根據(jù)上一步實(shí)驗(yàn)情況再取18只（36眼）日本大耳白兔，每組6只（12眼），分別在消化的第1、3、7天隨機(jī)各取出2只兔子剩余的角膜組織并作光鏡觀察（HE染色）。

5、r>　　結(jié)果：角膜完全消化的時(shí)間為：胃蛋白酶實(shí)驗(yàn)組分別為66天、65天、59天，平均63.33±2.19天，對(duì)照組分別為61天、59天、52天，平均57.33±2.73天，實(shí)驗(yàn)組明顯長(zhǎng)于對(duì)照組（P<0.05）；胰蛋白酶實(shí)驗(yàn)組分別為4天、4天、4天，平均4.00天；對(duì)照組分別為3天、3天、2天，平均為2.67±0.33天，實(shí)驗(yàn)組明顯長(zhǎng)于對(duì)照組（P<0.05）；膠原蛋白酶實(shí)驗(yàn)組分別為7天、3天、5天，平均5±1.15天；對(duì)照組分別為2天、2