加味益氣聰明湯對(duì)VD大鼠海馬神經(jīng)元突觸可塑性的影響.pdf

1、目的:研究加味益氣聰明湯對(duì)血管性癡呆(VD)大鼠行為學(xué)及大鼠海馬神經(jīng)元突觸結(jié)構(gòu)、海馬區(qū)膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿(Ach)、膽堿酯酶(AchE)、大腦皮層單胺類遞質(zhì)5-羥色胺（5-HT）、多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)的影響，初步闡明加味益氣聰明湯治療血管性癡呆的作用機(jī)制。
　　方法:1.分組:在Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中，通過觀察大鼠游泳軌跡及記錄相應(yīng)的時(shí)間，選擇記憶能力相似的60只雄性SD大鼠，采用隨機(jī)的原則分為12只假手術(shù)組

2、和48只手術(shù)組:模型組、尼莫地平組（簡(jiǎn)稱“對(duì)照1組”）、復(fù)方蓯蓉益智膠囊組（簡(jiǎn)稱“對(duì)照2組”）、加味益氣聰明湯組（簡(jiǎn)稱“實(shí)驗(yàn)組”）。手術(shù)組采用一次手術(shù)先后結(jié)扎左右頸總動(dòng)脈(CCA)制備VD模型;假手術(shù)組在手術(shù)過程中只是把左右頸總動(dòng)脈與神經(jīng)分離暴露出來，不需要結(jié)扎雙側(cè)血管。2.給藥:對(duì)照1組予以尼莫地平6.25mg/kg/d灌胃，對(duì)照2組予以復(fù)方蓯蓉益智膠囊0.375g/kg/d灌胃，實(shí)驗(yàn)組選用加味益氣聰明湯以14.58g/kg/d的劑量

3、給藥，假手術(shù)組、模型組灌胃均選用蒸餾水，按照所有藥物各自所需劑量配制成2ml/d給藥，一共持續(xù)30天。3.取材:5組內(nèi)分別隨機(jī)抽取2只（共10只）大鼠麻醉后行心臟灌注多聚甲醛內(nèi)固定取腦組織，準(zhǔn)備電鏡觀察的切片;每組各剩下的10只大鼠斷頭處死后剝離雙側(cè)海馬及大腦皮層，各自搗碎配液離心提取海馬組織勻漿及大腦皮層勻漿，保存在-20℃冰箱待測(cè)。4.指標(biāo)的檢測(cè)方法:各組大鼠的行為學(xué)變化主要通過水迷宮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè);海馬區(qū)Ach的含量選用ELISA法

4、測(cè)定;海馬區(qū)AchE的含量選擇分光光度法測(cè)定;大腦皮層區(qū)5-HT、DA、NE的含量主要選擇熒光分光光度法測(cè)定;在電鏡下觀察各組海馬區(qū)神經(jīng)元突觸超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　結(jié)果:(1)行為學(xué)變化:(a)定位航行結(jié)果:與假手術(shù)組比較，模型組大鼠逃避潛伏期(EL)明顯延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，對(duì)照1組、對(duì)照2組及實(shí)驗(yàn)組EL有所延長(zhǎng)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與模型組比較，對(duì)照1組、對(duì)照2組、實(shí)驗(yàn)組的EL明顯縮短，差異有統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01）;對(duì)照1組、對(duì)照2組及實(shí)驗(yàn)組各組兩兩之間比較EL有所不同，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。(b)空間探索實(shí)驗(yàn):與假手術(shù)組比較，模型組大鼠經(jīng)過有效區(qū)及平臺(tái)的次數(shù)顯著減少，停留在平臺(tái)及有效區(qū)的時(shí)間顯著縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01）;與模型組相比，對(duì)照1組、對(duì)照2組、實(shí)驗(yàn)組經(jīng)過平臺(tái)及有效區(qū)的次數(shù)增多顯著，平臺(tái)及有效區(qū)停留時(shí)間延長(zhǎng)明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01）;對(duì)照1組、對(duì)

6、照2組、實(shí)驗(yàn)組各組之間兩兩比較，經(jīng)過平臺(tái)及有效區(qū)的時(shí)間以及跨越平臺(tái)及有效區(qū)的次數(shù)無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。(2)ELISA檢測(cè)結(jié)果:與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬區(qū)Ach含量明顯降低，而海馬區(qū)AchE含量明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01），對(duì)照1組、對(duì)照2組及實(shí)驗(yàn)組較假手術(shù)組大鼠海馬區(qū)Ach含量降低，而在海馬區(qū)的AchE含量增高，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01）;與模型組相比，對(duì)照1組、對(duì)照2組及實(shí)驗(yàn)組大鼠

7、海馬區(qū)Ach含量增多較為顯著，而AchE含量降低明顯，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);與對(duì)照1組比較，對(duì)照2組大鼠海馬區(qū)Ach含量降低明顯，而海馬區(qū)AchE的含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01），實(shí)驗(yàn)組大鼠海馬區(qū)Ach含量降低，AchE含量有所增高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;與對(duì)照2組比較，實(shí)驗(yàn)組海馬區(qū)Ach含量輕微增高，Ache含量稍有降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠皮

8、層區(qū)NE、DA、5-HT明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，對(duì)照1組、對(duì)照2組以及實(shí)驗(yàn)組大鼠皮層區(qū)NE、DA、5-HT含量減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01）;與模型組比較，對(duì)照1組、對(duì)照2組、實(shí)驗(yàn)組大鼠皮層區(qū)NE、DA、5-HT明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01）;與對(duì)照1組比較，對(duì)照2組大鼠皮層區(qū)NE、DA、5-HT含量減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01），實(shí)驗(yàn)組大鼠皮層區(qū)NE、DA、5-HT含量有所

9、降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。對(duì)照2組與實(shí)驗(yàn)組之間皮層區(qū)NE、DA、5-HT含量變化不大，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)(3)電鏡結(jié)果:假手術(shù)組大鼠海馬區(qū)突觸密集度高，結(jié)構(gòu)清晰，突觸的各組成成分可被清楚辨認(rèn)，在突觸后致密區(qū)可見較深的染色，密度高。模型組突觸前膜內(nèi)的線粒體嵴變得模糊、腫脹明顯，突觸結(jié)構(gòu)模糊欠清，突觸數(shù)目減少甚多，在突觸后致密區(qū)可見較淺的染色，密度不高。與假手術(shù)組相比，模型組大鼠海馬區(qū)突觸數(shù)目減少明顯，突觸間隙

10、增寬，突觸后致密區(qū)染色變淺;與模型組相比，對(duì)照1組、對(duì)照2組和實(shí)驗(yàn)組大鼠海馬區(qū)突觸顯著增多，突觸間隙寬度變小，突觸后致密區(qū)染色變深、突觸活性區(qū)長(zhǎng)度變長(zhǎng);假手術(shù)組與對(duì)照1組、對(duì)照2組、實(shí)驗(yàn)組之間兩兩比較，上述突觸結(jié)構(gòu)參數(shù)之間的變化較小。
　　結(jié)論:1.結(jié)扎雙側(cè)CCA可成功制備與海馬區(qū)相關(guān)的學(xué)習(xí)記憶障礙的VD模型。
　　2.加味益氣聰明湯可改善VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能以及大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元的突觸結(jié)構(gòu)與功能。
　　3.加味益氣聰