瑞香狼毒根乙醇提取液對(duì)寄生水霉生長(zhǎng)影響的初步研究.pdf

1、寄生水霉常引起多數(shù)淡水魚類和魚卵患水霉病，導(dǎo)致魚類大量死亡，嚴(yán)重影響了水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。目前對(duì)于已經(jīng)發(fā)生水霉病的水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物，并沒有理想的治療藥物。瑞香狼毒、月腺大戟根具有廣泛的抑菌活性，但在抑制寄生水霉方面還沒有相關(guān)研究。為探究瑞香狼毒、月腺大戟根對(duì)寄生水霉生長(zhǎng)的影響，本研究采用超聲輔助系統(tǒng)溶劑提取法制備了兩種常用狼毒根的提取液，比較了兩種常用狼毒根的提取液對(duì)寄生水霉的最低抑菌濃度，篩選出瑞香狼毒乙醇提取液為最佳提取液;進(jìn)一步研究

2、了瑞香狼毒乙醇提取液對(duì)寄生水霉菌絲生長(zhǎng)、孢子萌發(fā)率、菌絲形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的影響，并通過(guò)模擬治療過(guò)程探究了瑞香狼毒乙醇提取液對(duì)鯽魚寄生水霉病的治療效果。
　　1.從患病鯽魚身上分離出一株水霉菌，通過(guò)純化培養(yǎng)，經(jīng)形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)鑒定出該菌株為寄生水霉菌（Saprolegnia parasitica）。
　　2.根據(jù)溶劑極性大小，用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、水5種溶劑組成溶劑系統(tǒng)，采用超聲技術(shù)分別提取了瑞香狼毒、月腺大戟根部有

3、效成分。結(jié)果顯示，水溶劑對(duì)月腺大戟的提取率最高為21.38％，丙酮溶劑對(duì)月腺大戟的提取率最低為0.98％，石油醚、乙酸乙酯、乙醇溶劑對(duì)月腺大戟的提取率分別為:2.19％、1.91％、1.51％;乙酸乙酯溶劑對(duì)瑞香狼毒的提取率最高為12.03％，石油醚對(duì)瑞香狼毒的提取率最低為0.50％，丙酮、乙醇、水溶劑對(duì)瑞香狼毒的提取率分別為:4.22％、1.45％、3.26％。
　　3.采用微量稀釋法分別測(cè)定石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、水5種

4、溶劑提取液對(duì)寄生水霉孢子的最低抑菌濃度，其中月腺大戟不同溶劑提取液的最低抑菌濃度為2.5mg/mL，最佳提取溶劑為乙醇;瑞香狼毒不同溶劑提取液的最低抑菌濃度為0.15625mg/mL，最佳提取溶劑為乙醇。
　　4.通過(guò)測(cè)定瑞香狼毒乙醇提取液對(duì)寄生水霉菌絲生長(zhǎng)的影響，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組菌落生長(zhǎng)直徑顯著低于空白對(duì)照組(P＜0.05)。瑞香狼毒乙醇提取液濃度為0.3125mg/mL時(shí)，對(duì)寄生水霉菌絲生長(zhǎng)抑制率達(dá)100％，毒力回歸方程Y=3.15

5、03X+9.9012，EC50為0.02781mg/mL，瑞香狼毒乙醇提取液對(duì)寄生水霉的抑制作用接近亞甲基藍(lán)對(duì)水霉菌的抑制作用。20℃培養(yǎng)24h，空白對(duì)照組寄生水霉孢子平均萌發(fā)率為86.67％;0.625mg/mL瑞香狼毒乙醇提取液處理組，寄生水霉孢子萌發(fā)率為0.00％，回歸方程為Y=290.45X2-304.45X+78.106。光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組寄生水霉菌絲體染色不均勻，出現(xiàn)透明現(xiàn)象。掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組菌絲體表面粗糙、

6、皺縮。透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組寄生水霉孢子細(xì)胞壁模糊，細(xì)胞質(zhì)電子密度低，細(xì)胞內(nèi)容物少，出現(xiàn)大量空泡，細(xì)胞結(jié)構(gòu)被破壞;試驗(yàn)組菌絲體細(xì)胞壁模糊、皺縮甚至消失，細(xì)胞質(zhì)電子密度低，細(xì)胞內(nèi)容物少，相鄰細(xì)胞膜出現(xiàn)部分粘連現(xiàn)象。瑞香狼毒乙醇提取液能通過(guò)破壞寄生水霉菌絲、寄生水霉孢子細(xì)胞結(jié)構(gòu)有效抑制寄生水霉生長(zhǎng)。
　　5.模擬治療過(guò)程對(duì)鯽魚影響的研究中，只有0.625mg/mL組在試驗(yàn)24h，治療效果顯著高于空白對(duì)照組(P＜0.05)。觀察到未感

7、染寄生水霉的試驗(yàn)魚沒有明顯不適癥狀;感染寄生水霉病的試驗(yàn)魚出現(xiàn)了反應(yīng)遲緩、游動(dòng)失衡甚至死亡現(xiàn)象，在死亡的試驗(yàn)魚眼部觀察到點(diǎn)狀出血點(diǎn)，與鯽魚的中毒癥狀觀察試驗(yàn)結(jié)果相似。對(duì)死亡率統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，未感染寄生水霉的試驗(yàn)魚沒有出現(xiàn)死亡情況;感染寄生水霉病的鯽魚，試驗(yàn)24h，0.625mg/mL藥液浸泡組死亡率顯著高于空白對(duì)照組(P＜0.05);試驗(yàn)48h，藥物濃度達(dá)到0.15625mg/mL浸泡組患病鯽魚死亡率均顯著高于空白對(duì)照組(P＜0.05);試驗(yàn)