基于胰島素抵抗研究海帶多糖對高脂飲食誘導(dǎo)LDLr---小鼠動脈粥樣硬化的干預(yù)機(jī)制.pdf

1、海帶（Laminaria japonica）是一種常見的海洋蔬菜，其中，海帶多糖作為海帶的一種主要生物活性物質(zhì)，具有抗動脈粥樣硬化等功效，而極低密度脂蛋白(VLDL)的過度分泌是動脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展的重要成因之一，且VLDL的分泌與胰島素信號通路高度相關(guān)。本課題主要從改善胰島素抵抗角度研究了海帶多糖LJP61A干預(yù)高脂暴露誘發(fā)LDLr-/-小鼠動脈粥樣硬化的調(diào)控機(jī)制，主要實驗結(jié)果如下：
　　(1)LJP61A對高脂飼料(HFD)

2、誘導(dǎo)動脈粥樣硬化LDLr-/-小鼠的系統(tǒng)性胰島素抵抗及肝性脂肪變性的調(diào)控作用:采用HFD誘發(fā)LDLr-/-小鼠動脈粥樣硬化的實驗?zāi)Ｐ?，研究了LJP61A對小鼠系統(tǒng)性胰島素抵抗及肝性脂肪變性的干預(yù)作用。結(jié)果顯示，200mg/kg/day劑量的LJP61A使血漿葡萄糖、胰島素的含量及HOMA-IR值分別比模型組降低了32.1％、36.3％、59.0％。肝臟組織HE染色顯示，LJP61A能顯著抑制HFD誘導(dǎo)LDLr-/-小鼠的脂肪空泡積累。<

3、br>　　(2)LJP61A抑制VLDL的過度分泌:通過對各實驗組血清中VLDL apoB、VLDLTG、VLDL CE水平的檢測，我們發(fā)現(xiàn)200mg/kg/day劑量的LJP61A使血漿中VLDLapoB、VLDL TG、VLDL CE的水平分別比HFD組降低了47.1％、65.1％、46.2％，表明LJP61A顯著抑制高脂飲食誘導(dǎo)VLDL的過度分泌。Western blot實驗表明，LJP61A可以調(diào)控IRS1和IRS2介導(dǎo)的PI3

4、K-AKT-mTORC1及PI3K-AKT-Foxo1信號通路。RT-qPCR分析結(jié)果表明，mTORC1及Foxo1下游與VLDL裝配與分泌相關(guān)的SREBP-1c、ACC1、FAS、Sortilin、apoB、apoCⅢ和MTP mRNA表達(dá)均受到影響。以上結(jié)果表明LJP61A可能可以通過調(diào)控胰島素信號通路，從而影響VLDL的分泌。
　　(3) LJP61A抑制胰島素抵抗HepG2細(xì)胞的TG合成及apoB分泌:利用高糖、高胰島素誘

5、導(dǎo)HepG2細(xì)胞產(chǎn)生胰島素抵抗的細(xì)胞模型，模擬肝臟胰島素抵抗。研究發(fā)現(xiàn)，LJP61A可以抑制mTORC1及Foxo1的活化，影響mTORC1和Foxo1下游與VLDL的裝配和分泌相關(guān)基因的mRNA表達(dá)。同時，LJP61A對mTORC1和Foxo1上游IRS-PI3K-AKT信號通路有調(diào)控作用。為了證實LJP61A對mTORC1及Foxo1的調(diào)控效應(yīng)是否與其對胰島素信號通路的調(diào)控作用相關(guān)，進(jìn)一步應(yīng)用mTORC1與Foxo1抑制劑（Rapa

6、mycin和AS1842856）處理細(xì)胞。結(jié)果表明，LJP61A通過調(diào)控PI3K-AKT-mTORC1信號通路，引起了mTORC1下游基因SREBP-1c、ACC1、FAS和Sortilin等mRNA表達(dá)變化，從而調(diào)控了TG合成與apoB降解。此外，LJP61A還能通過改善受損的胰島素信號通路，使細(xì)胞核Foxo1蛋白表達(dá)量下降，從而引起Foxo1下游基因apoCⅢ和MTP mRNA表達(dá)量的變化，進(jìn)而調(diào)控apoB的脂化過程。
　　綜