超聲監(jiān)測下不同方式復(fù)灌-再缺血后處理對兔睪丸完全扭轉(zhuǎn)復(fù)位損傷的影響.pdf

1、目的：探討不同方式的間隔缺血后處理對急性單側(cè)睪丸完全扭轉(zhuǎn)復(fù)位損傷的影響和相關(guān)機(jī)制，評價超聲技術(shù)在睪丸完全扭轉(zhuǎn)當(dāng)時及術(shù)后的運(yùn)用價值。
　　 方法：78只成年健康新西蘭大白兔隨機(jī)分成：對照組（假手術(shù)組/S組）；A組（A0、A1、A2、A3）；B組（B0、B1、B2、B3）；C組（C0、C1、C2、C3），每組6只,選擇左側(cè)睪丸進(jìn)行扭轉(zhuǎn)手術(shù)，分別將A、B、C組兔左側(cè)睪丸血流完全阻斷2h、4h、6h。達(dá)到相應(yīng)缺血時間后解除結(jié)扎，血流出現(xiàn)

2、即刻，A0、B0、C0組不進(jìn)行任何處理；A1、B1、C1組行復(fù)灌15s/缺血15s，反復(fù)3次, A2、B2、C2組行復(fù)灌30s/缺血30s, 反復(fù)3次，A3、B3、C3組行復(fù)灌45s/缺血45s，反復(fù)3次。術(shù)前及再灌注后3天分別進(jìn)行雙側(cè)睪丸超聲造影，分析各組造影參數(shù)β、TTP、PBD、DT/2變化。再灌注后，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)3天，切除術(shù)側(cè)睪丸，觀察組織切片光鏡下病理變化（HE染色），進(jìn)行Johnsen’s評分，電鏡下觀察超微結(jié)構(gòu)變化，檢測睪丸

3、組織MDA含量及SOD活性，Western blot檢測睪丸生精上皮細(xì)胞中Caspase-3、Bcl-2的表達(dá)情況，Tunel法檢測細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI），并對各組進(jìn)行對比研究。
　　 結(jié)果：術(shù)前各組術(shù)側(cè)睪丸超聲造影參數(shù)與對照組間無顯著差別（P>0.05）。再灌注3天后，A組各小組間及與S組間各造影參數(shù)無顯著差別（P>0.05），B組術(shù)側(cè)睪丸DT/2較S組均顯著延長（P>0.05），B1、B2組PBD較S組升高（P<0.05），B

4、0、B3組PBD與S組無顯著差別（P>0.05），C組術(shù)側(cè)睪丸造影有不同程度的充盈缺損，感興趣區(qū)內(nèi)造影曲線近似一條直線。睪丸組織MDA含量隨缺血程度加重而升高，SOD活性隨缺血程度加重而降低，與S組均有顯著差別（P<0.05），兩者變化是一致的，A3組MDA含量較A組其它小組顯著升高（P<0.05），SOD活性較A組其它小組顯著下降（P<0.05），B1、B2組MDA含量顯著低于B0、B3組，SOD活性顯著高于B0、B3組，差別均有統(tǒng)計

5、學(xué)意義（P<0.05），C組各小組間MDA含量、SOD活性均無顯著差別（P>0.05）。光鏡下，隨缺血時間的延長Johnsen’s評分逐漸下降，A0、A1、A2組Johnsen’s評分無顯著差別（P>0.05），并且均顯著高于A3組（P<0.05）,B1、B2組間Johnsen’s評分無顯著差別（P>0.05），并且均顯著高于B0、B3組（P<0.05），B0組Johnsen’s評分顯著高于B3組（P<0.05），C組各小組間Johns

6、en’s評分無顯著差別（P>0.05）。電鏡下，隨缺血時間的延長各級生精細(xì)胞損傷呈現(xiàn)明顯的程度差別。Tunel凋亡指數(shù)檢測，A3組AI最高（P<0.05），A0、A1組AI無顯著差別（P>0.05），A2組AI略高于A0、A1組（P<0.05）,B1、B2組凋亡指數(shù)明顯低于B0、B3組（P<0.05）,B1凋亡指數(shù)略低于B2組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）、B0、B3組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；C1、C2組凋亡指數(shù)明顯低于

7、C0、C3組（P<0.05），且C1組低于C2組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Western blot 檢測，A3組術(shù)側(cè)睪丸caspase-3表達(dá)較A組其它亞組有輕微上調(diào)（P<0.05），B1、B2組中caspase-3的表達(dá)較B0、B3組明顯下降（P<0.05），但仍高于對照組，C組caspase-3表達(dá)較對照組顯著上調(diào)（P<0.05），Bcl-2僅于對照組及A組中觀察到少量表達(dá)，且各組間與對照組無顯著差別（P>0.05）；

8、r>　　 結(jié)論：①彩色多普勒超聲可對急性睪丸完全扭轉(zhuǎn)做出準(zhǔn)確的診斷，超聲造影時間-強(qiáng)度曲線可間接反應(yīng)復(fù)位后睪丸內(nèi)微循環(huán)狀態(tài)情況，對復(fù)位后的效果進(jìn)行評價，指導(dǎo)下一步的治療；②缺血后處理可明顯減輕睪丸再灌注損傷導(dǎo)致的生殖細(xì)胞大量凋亡；③缺血后處理措施抗凋亡的分子保護(hù)機(jī)制可能是通過減少ROS生成使得caspase-3表達(dá)下調(diào)，從而減少凋亡發(fā)生；④缺血后處理的保護(hù)效應(yīng)與缺血時間、實施的具體方式有一定的關(guān)系；⑤隨缺血時間的延長再灌注損傷更突出，