屋塵螨與雞蛋白交叉過(guò)敏的流行病學(xué)分析及實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：過(guò)敏反應(yīng)主要由血清中免疫球蛋白 E（IgE）介導(dǎo)，通過(guò)效應(yīng)細(xì)胞釋放生物活性介質(zhì)而產(chǎn)生各種臨床表現(xiàn)，如蕁麻疹、血管神經(jīng)性水腫等。有時(shí)，即使是微量蛋白質(zhì)也可引起敏感個(gè)體出現(xiàn)致命的反應(yīng)。隨著對(duì)過(guò)敏性疾病的不斷研究，交叉過(guò)敏反應(yīng)也逐漸引起人們的重視。所謂交叉過(guò)敏就是當(dāng)兩種蛋白質(zhì)在序列或結(jié)構(gòu)上高度同源時(shí)，出現(xiàn)相同的抗原決定簇的幾率增高，易出現(xiàn)交叉反應(yīng)。
　　檢測(cè)屋塵螨與雞蛋白之間是否存在交叉過(guò)敏、交叉過(guò)敏發(fā)生的概率以及發(fā)生交叉反應(yīng)的蛋

2、白種類；屋塵螨及雞蛋白市售蛋白分子組分；比較免疫印跡法與狹縫免疫印跡法（Slot-blot）符合概率。基于目前屋塵螨與雞蛋白過(guò)敏的發(fā)病率高，診斷及防治難的特點(diǎn)，本研究成果為屋塵螨與雞蛋白過(guò)敏提供了可行且可靠的個(gè)體化治療方法，并且使臨床醫(yī)師能更好的指導(dǎo)過(guò)敏患者正確飲食及生活習(xí)慣。
　　方法：
　　1.流行病學(xué)調(diào)查及分析：對(duì)2015.01-2016.10就診于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院皮膚科進(jìn)行血清特異性過(guò)敏原檢測(cè)的患者進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)

3、查，并結(jié)合sIgE檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。
　　2.選取塵螨特異性sIgE（specific IgE，sIgE）與總IgE（total IgE，tIgE）同時(shí)陽(yáng)性血清進(jìn)行狹縫免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Slot-blot），對(duì)比Slot-blot檢測(cè)結(jié)果與艾康生物技術(shù)有限公司銷售的免疫印跡法結(jié)果的一致性。
　　3.采用Slot-blot法進(jìn)行交叉實(shí)驗(yàn)，采用雞蛋白sIgE與tIgE同時(shí)陽(yáng)性血清與屋塵螨抗原進(jìn)行反應(yīng)，檢測(cè)塵螨與雞蛋白是否存在交

4、叉反應(yīng)及交叉概率。
　　4.采用Slot-blot進(jìn)行抑制實(shí)驗(yàn)，先將雞蛋白與屋塵螨sIgE陽(yáng)性血清進(jìn)行反應(yīng)，然后再與包被的屋塵螨抗原反應(yīng)，檢測(cè)屋塵螨與雞蛋白交叉抑制率和有效抑制濃度。
　　5.將屋塵螨及雞蛋白粗提取液進(jìn)行聚丙烯酰氨凝膠電泳（SDS-PAGE），檢測(cè)各蛋白組分的完整性、分子量大小及所占比例。6對(duì)屋塵螨和雞蛋白粗提取液進(jìn)行免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western bolt，WB），選取屋塵螨sIgE與tIgE同時(shí)陽(yáng)性血清和雞

5、蛋白血sIgE與tIgE同時(shí)陽(yáng)性血清各10例為探針，檢測(cè)各組分的抗原性。
　　結(jié)果：
　　1.流行病學(xué)調(diào)查
　　1.1.本研究對(duì)2015.01-2016.10就診于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院皮膚科的診斷為過(guò)敏反應(yīng)相關(guān)性疾病的患者血清 sIgE檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了回顧性分析。病例總數(shù)為5186例，男3100例，女2086例，年齡31.72±1.12歲，病程1周-數(shù)年，病種以蕁麻疹、濕疹及皮炎為主。其中tIgE陽(yáng)性為3828例，塵螨s

6、IgE陽(yáng)性患者1223例，雞蛋白sIgE陽(yáng)性患者822例，其中塵螨與雞蛋白sIgE同時(shí)陽(yáng)性病例達(dá)419例，塵螨與雞蛋白sIgE同時(shí)陽(yáng)性病例占?jí)m螨sIgE陽(yáng)性的病例的34％。
　　1.2.過(guò)敏原 sIgE陽(yáng)性病例的分布情況：塵螨1223（31.9%），雞蛋白822（21.5%），牛奶430（11.2%），牛羊肉344（9%），小麥223（5.8%），貓狗毛300（7.8%），霉菌172（4.5%），矮豚草166（4.3%），樹(shù)組合1

7、14(3%)，蟑螂109（2.8%），葎草96（2.5%），腰果花生159（4.2%），魚(yú)蝦蟹152（4%），芒果150（3.9%）。
　　2.免疫印跡法（艾康生物有限公司）與Slot-blot法實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)比分析
　　60例塵螨sIgE陽(yáng)性（免疫印跡法）的血清中，56例在Slot-blot實(shí)驗(yàn)中顯示陽(yáng)性，一致性概率達(dá)95%。
　　3.屋塵螨抗原與雞蛋白陽(yáng)性血清交叉過(guò)敏反應(yīng)概率（Slot-blot法）
　　將包埋于

8、PVDF膜上的屋塵螨抗原與雞蛋白sIgE陽(yáng)性血清反應(yīng)，隨機(jī)檢測(cè)60例，30例出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，其出現(xiàn)交叉反應(yīng)概率為50%。
　　4.雞蛋白對(duì)屋塵螨抗原抗體反應(yīng)的交叉抑制率的檢測(cè)
　　雞蛋白對(duì)屋塵螨抗原抗體反應(yīng)有明顯的抑制作用，且呈濃度依賴性，當(dāng)雞蛋白干預(yù)抗原濃度為100μg/ml時(shí)，達(dá)到最大抑制率，為93%。
　　5.屋塵螨提取液與雞蛋白提取液中各蛋白組分分析
　　5.1.屋塵螨列可見(jiàn)3條主要條帶，分別是57kd，5

9、0kd，16kd，各組分所占比例依次是55.5%，43.4%，1.3%，其中57kd的蛋白所占比例最大。
　　5.2.雞蛋白列可見(jiàn)4條主要條帶，分別是75kd，44.5kd，28kd，14.3kd，各組分所占比例依次是19.6%，66%，7.7%，6.6%，其中所占比例最大的是44.5kd的條帶。
　　6.屋塵螨與雞蛋白免疫抗原性分析（WB檢測(cè)）
　　6.1.10例塵螨sIgE陽(yáng)性患者的血清池為探針，50kd、57kd

10、處可見(jiàn)明顯陽(yáng)性反應(yīng)條帶，考慮是Derp10（原肌凝蛋白）和Derp4（α-淀粉酶）。
　　6.2.10例雞蛋白 sIgE陽(yáng)性的患者血清池為探針。主要陽(yáng)性反應(yīng)條帶有3條，分別是14.3kd、44.5kd、75kd，考慮分別為溶菌酶（Lys）、卵白蛋白（OVA）和卵轉(zhuǎn)鐵蛋白（OVT）。
　　結(jié)論：
　　1.就診于我院的過(guò)敏反應(yīng)相關(guān)疾病的患者，主要過(guò)敏原是塵螨組合和雞蛋白。
　　2.屋塵螨主要過(guò)敏原為Derp10（原肌