向日葵黑莖病和莖潰瘍病菌生物學特征、分子檢測及檢疫處理.pdf

1、向日葵是我國重要的油料作物之一，具有較高的營養(yǎng)價值。近幾年，我國不斷的從國外引進向日葵種子，種子上攜帶的多種危險性病害傳入我國的風險加大。其中向日葵黑莖病菌Leptosphaeria lindguistii和莖潰瘍病菌Diaporthe helianthi是兩種重要的檢疫性真菌病害，向日葵黑莖病菌在我國局部地區(qū)有發(fā)生，莖潰瘍病菌未在我國出現(xiàn)，為防忠于未然，急需建立一種快速的分子檢測技術(shù)。
　　 本文描述了向日葵黑莖病菌在大田危害

2、癥狀和發(fā)生時各個時期癥狀表現(xiàn)，以及觀察兩種病原菌和向日葵上寄生的其他病原菌的形態(tài)特征，其中包括菌落、分生孢子器、分生孢子。調(diào)研人員在寧夏和新疆向日葵病害田間采集的具有明顯病害癥狀的病殘體，本文針對兩種病原菌致病癥狀特征對采集回來的病殘體進行實驗室分離檢疫鑒定。通過形態(tài)學以及ITS區(qū)域的PCR擴增克隆測序，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，新疆向日葵莖稈編號TXMGX、BXC1、XYHJ為向日葵黑莖病菌Leptosphaeria lindguistii，除此之外

3、，在新疆地區(qū)還發(fā)現(xiàn)梭孢殼屬Thielavia hyalocarpa、光黑殼屬Preussia sp、向日葵鏈格孢 Alternaria helianth、大麗輪枝菌Verticillium dahliae、大刀鐮孢球黑孢 Nigrospora sphaerica，在寧夏地區(qū)發(fā)現(xiàn)向日葵鏈格孢 Alternaria helianthi與細鏈格孢 Alternaria alternata。
　　 為了建立一種快速檢測向日葵黑莖病菌和莖

4、潰瘍病菌的分子生物學方法，本研究通過收集不同地區(qū)的向日葵黑莖病菌和莖潰瘍病菌菌株、向日葵上寄生的其他病害以及購買的標準菌株作為供試材料;以油菜黑莖病菌Leptosphaeria biglobosa的肌動蛋白Actin基因設計的一對引物actF/actR;利用actF/actR對向日葵黑莖病菌和莖潰瘍病菌以及向日葵上寄生的其他11種病害菌絲DNA進行Actin-PCR擴增，擴增產(chǎn)物克隆測序經(jīng)軟件比對分析后，依據(jù)Actin基因序列差異位點設

5、計2種病原菌的特異引物LLF/LLR和DHF/DHR。然后以通用引物ITS1/ITS4和自行設計2對特異引物經(jīng)過優(yōu)化并建立三重PCR檢測方法，結(jié)果表明ITS1/ITS4擴增片段為580bp，特異引物LLF/LLR擴增片段為255bp，特異引物DHF/DHR擴增片段為394bp，據(jù)此可準確鑒定出2種檢疫性真菌病害向日葵黑莖病菌和向日葵莖潰瘍病菌。
　　 對危險性真菌病害向日葵黑莖病菌和莖潰瘍病菌檢疫處理研究，本文采用2種病菌殺滅技

6、術(shù):溴甲烷和熱水在不同條件下熏蒸和熱處理2種病原菌的菌絲，并觀察在同等處理條件下對向日葵種子萌發(fā)的影響。采用32 g/m3溴甲烷熏蒸處理24h可100％殺滅向日葵黑莖病菌和向日葵莖潰瘍病菌，且對向日葵種子的萌發(fā)無影響。52℃熱水處理向日葵黑莖病菌和向日葵莖潰瘍病菌超過3min后兩種菌無活性，不能繼續(xù)生長，而熱水處理向日葵種子15min，對向日葵種子的萌發(fā)無影響。因此，一定條件下溴甲烷熏蒸處理和熱水處理可以對向日葵種子中攜帶向日葵黑莖病菌