XIAP蛋白UBA和BIR2結(jié)構(gòu)域的核磁共振研究.pdf

1、X-染色體相關(guān)的凋亡抑制蛋白(XIAP)，是IAP家族中最有效的Caspase抑制劑，全長有497個氨基酸，分子量約57 kDa，包括3個BIR結(jié)構(gòu)域、一個RING結(jié)構(gòu)域和一個UBA結(jié)構(gòu)域。BIR結(jié)構(gòu)域是一個大約有70個氨基酸殘基并且有一個鋅指結(jié)構(gòu)片段，位于XIAP蛋白的N端。BIR1結(jié)構(gòu)域可以激活下游TAK1信號途徑；BIR2/BIR3結(jié)構(gòu)域可以有效地結(jié)合并抑制caspase-3、caspase-7及caspase-9的活性。碳末端R

2、ING結(jié)構(gòu)域可以作為泛素連接酶E3酶，能夠介導(dǎo)XIAP自身以及與它相互作用的蛋白分子泛素化，以抑制細(xì)胞的凋亡。XIAP的UBA結(jié)構(gòu)域相對BIR結(jié)構(gòu)域和RING結(jié)構(gòu)域被發(fā)現(xiàn)的相對晚一些，研究的也少。UBA位于BIR3結(jié)構(gòu)域與RING結(jié)構(gòu)域之間，約有80個氨基酸殘基，并能夠與Ubiqutin相互作用。Ubiqutin除經(jīng)典界面殘基發(fā)生化學(xué)位移以外，還有尾端殘基。尾端殘基是否與UBA結(jié)合還不清楚。本論文在第二章通過高分辨核磁共振技術(shù)，詳細(xì)的探

3、究了野生型Ubiquti以及尾端切掉后Ubiqutin與UBA結(jié)合狀態(tài)，測定了結(jié)界面上的殘基以及結(jié)合常數(shù)，發(fā)現(xiàn)尾端切掉后Ubiqutin與UBA結(jié)合力變?nèi)酰f明尾端在結(jié)合中起重要的作用。
　　本文為探究XIAP與銅的作用機(jī)制，截取XIAP的BIR2結(jié)構(gòu)域作為研究對象，對BIR2野生型及突變體的表達(dá)與純化進(jìn)行了探索，并獲得了15N同位素標(biāo)記穩(wěn)定的可溶蛋白，利用高分辨核磁共振得到了野生型及突變體的2D1H-15N HSQC譜圖，為下一