產(chǎn)鄰苯二酚工程菌的構(gòu)建及發(fā)酵條件的優(yōu)化.pdf

1、苯胺用途廣，危害大，對它的生物法處理潛力很大。在好氧菌中，苯胺雙加氧酶基因簇是降解苯胺的關(guān)鍵基因，編碼苯胺降解途徑的第一個酶，負(fù)責(zé)將苯胺轉(zhuǎn)化成為鄰苯二酚。而鄰苯二酚是一種重要的化工產(chǎn)品，用途廣泛，需求量大，對其的生物法生產(chǎn)與許多傳統(tǒng)方法相比具有更大的優(yōu)勢。 用實(shí)驗(yàn)室保存的一株能高效降解苯胺的不動桿菌ANA5構(gòu)建了XbaI完全酶切的基因文庫，通過菌落原位雜交，結(jié)合功能篩選等方法從中篩選到了陽性克隆，經(jīng)亞克隆測序拼接得到了完整的

2、苯胺雙加氧酶基因簇。序列分析表明該基因簇包含6個完整的ORF，有啟動子特征序列，全序列與已報(bào)道的不動桿菌YAA的苯胺雙加氧酶基因簇在氨基酸水平上有較高的同源性。經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該基因簇在連接于無啟動子的pLAFR6載體上時(shí)表達(dá)效果較好，用此重組質(zhì)粒構(gòu)建了基因工程菌。經(jīng)發(fā)酵條件優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)該工程菌在苯胺濃度0.5mg/mL，采用LB培養(yǎng)基，E Coli DH5α為宿主菌，于37℃培養(yǎng)，接種量為3％的條件下，鄰苯二酚產(chǎn)量在20h達(dá)到0.546mg