深海和南極產油真菌篩選、鑒定和產油菌株發(fā)酵條件優(yōu)化的研究.pdf

1、本論文的內容主要是研究大洋與南極樣品的真菌多樣性、采用尼羅紅與氯化三苯基四氮唑（TTC）方法進行產油真菌的初篩、采用氣相色譜方法對產油菌的脂肪酸成分進行分析及研究培養(yǎng)基成份對產油菌產油發(fā)酵的影響。主要結果如下：
　　對中太平洋（6個站位）、南大西洋（2個站位）及西太平洋（22個站位）共30個站位的沉積物進行分離鑒定，一個獲得75株真菌，通過ITS鑒定結果顯示，這75株菌屬于14個屬，它們分別是：Aspergillus sp.（27

2、株）、Penicillium sp.（21株）、Cladosporium sp.（8株）、Fusarium sp.（6株）、Alternaria（2株）、Exophiala sp.（2株）、Engyodontium sp.（2株）、Acremonium sp.（1株）、Nectria sp.（1株）、Tritirachium sp.（1株）、Aureobasidium sp.（1株）、Thielavia sp.（1株）、Lecythop

3、hora sp.（1株）、Sarocladium sp.（1株）。三個海區(qū)中菌株數(shù)量最多的為曲霉屬的真菌，可見曲霉屬真菌在這三個海區(qū)中為優(yōu)勢屬，其次為青霉屬。在太平洋中，枝孢屬的真菌也有一定的分布。其余屬均只有幾株，表明在三個大洋中分布較少。同時分別使用尼羅紅和TTC對大洋樣品中分離得到的369株真菌進行產油初篩，一共獲得61株產油菌，分別屬于10個屬：Aspergillus（21株）、Fusarium（13株）、Cladosporiu

4、m（10株）、Penicillium（9株）、Engyodontium（2株）、Sarocladium（2株）、Alternaria（1株）、Aureobasidium（1株）、Lecythophora（1株）、Nectria（1株）。產油菌所占比例為18.70％。其中曲霉屬菌株占產油菌比例最高，為30.43%，其次為鐮刀屬菌株、枝孢屬菌株與青霉素菌株，分別占總產油菌屬的18.84%、14.49%與13.04%。
　　對中國第29

5、次南極科學考察獲得的南極普里茲灣海域23個站位的深海沉積物樣品進行了真菌分離培養(yǎng)，共獲得了11個屬的21株真菌。分別是：Penicillium（9株）、Cladosporium（3株）、Acremonium（1株）、Aureobasidium（1株）、Botryotinia（1株）、Eurotiales（1株）、Exophiala（1株）、Fusarium（1株）、Nectria（1株）、Phoma（1株）、Sarocladium（1株

6、）。南極普里茲灣海域的真菌多樣性較高，其中青霉屬菌株最多，占總菌株比例為42.85%，是普里茲灣真菌中的優(yōu)勢屬，其次為枝孢屬菌株，占總菌株比例為14.29%。分別用尼羅紅和TTC對南極普里茲灣海域分離得到的21株真菌進行產油初篩，共獲得8株產油菌，分別屬于7個屬：Penicillium（2株）、Aureobasidium（1株）、Cladosporium（1株）、Eurotiales（1株）、Exophiala（1株）、Fusarium

7、（1株）、Sarocladium（1株）。產油菌占總菌株的比例為38%。
　　對分離得到的產油菌進行脂肪酸分析，結果表明：這些產油菌所含的基本為C16-C18脂肪酸，不飽和脂肪酸含量較高，脂肪酸中具有較長的碳直鏈且沒有碳支鏈，因此可以作為生物柴油制備的原料油。
　　考慮到油脂生產成本，尋找可利用廉價底物高產油脂的微生物具有深遠的意義。為了尋找能夠直接利用廉價底料作為碳源產油的真菌菌株，本文使用含有TTC的糖蜜培養(yǎng)基分離南極沉

8、積物樣品，獲得一株產油菌，為P7-07-M1，屬名為：Nectria，該菌株可以直接利用糖蜜作為碳源發(fā)酵產油。
　　對從南極產油菌中選擇一株產油菌（P7-07-M1），從大洋產油菌中選擇兩株產油菌（JL7KGC01A-M7與MP4CTD-11-M5）進行培養(yǎng)基優(yōu)化，結果顯示：菌株P7-07-M1達到最高產油量的時間為第8天，最適氮源和最適碳源分別為蛋白胨與葡萄糖，最適C/N比為168，最佳CuSO4.5H2O濃度為0.0001g/

9、L，最佳MnSO4.H2O濃度為0.004g/L，通過培養(yǎng)基優(yōu)化，菌株P7-07-M1產油量提升了27.89%；菌株JL7KGC01A-M7達到最高產油量的時間為第7天，最適氮源和最適碳源分別為蛋白胨與葡萄糖，最適C/N比為140，最佳CuSO4.5H2O濃度為0.0002g/L，最佳MnSO4.H2O濃度為0.003g/L，通過培養(yǎng)基優(yōu)化，菌株JL7KGC01A-M7的產油量提升了30.15%；菌株MP4CTD-11-M5達到最高產油