峨?yún)⑻崛∥锛捌鋯误w成分抗腫瘤活性及作用機理的研究.pdf

1、目的:探討峨?yún)⑻崛∥飳τ贖EPG2、MG-63、B16、HELA細胞體外的抗腫瘤活性和促凋亡的作用研究;探討峨?yún)?nèi)酯的急性毒性以及峨?yún)?nèi)酯對H22荷瘤小鼠的體內(nèi)抗腫瘤活性及其分子機制。
　　 方法:應(yīng)用MTT比色法檢測不同濃度峨?yún)⑻崛∥?0、2.5、5、10、20、40、80μg/ml)對HEPG2、MG-63、B16、HELA細胞增殖抑制作用，分別計算不同藥物對腫瘤細胞生長的抑制率與半數(shù)抑制濃度IC50;采用DAPI染色法、瓊

2、脂糖凝膠電泳法(DNAladder法)檢測峨?yún)?nèi)酯對HEPG2、MG-63、B16、HELA細胞凋亡形態(tài)學(xué)觀察;計算峨?yún)?nèi)酯對昆明小鼠的半數(shù)致死量LD50;采用腹水型肝癌細胞株建立小鼠移植腫瘤模型，待造模成功后隨機將小鼠分為7組，分別以峨?yún)?nèi)酯高劑量、中劑量、低劑量組、峨?yún)⒍嗵墙M以及替加氟組作為治療組，模型組及空白組給予0.5％CMC-Na作為對照。治療結(jié)束后，觀察小鼠的一般狀態(tài)，胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、藥物的抑瘤率及不同藥物組對小鼠的生命

3、延長率，通過免疫組化技術(shù)初步檢測給予不同劑量的腫瘤組織中bax、bcl-2、P53的表達情況，探討峨?yún)⒖鼓[瘤的分子機制。
　　 結(jié)果:1、峨?yún)⑹兔烟崛∥飳EPG2、HELA細胞的抑制作用十分明顯，經(jīng)計算得出，峨?yún)⑹兔烟崛∥飳EPG2、HELA細胞的IC50值分別為36.53μg/ml和18.25μg/ml，對于MG-63和B16細胞抑制作用較小;峨?yún)⒙确绿崛∥飳EPG2、HELA兩種腫瘤細胞的IC50值分別為40.62

4、μg/ml和45.66μg/ml，對于MG-63和B16細胞抑制作用較小;峨?yún)⒁宜嵋阴ヌ崛∥锖投雲(yún)⒍嗵菐缀鯚o體外抗腫瘤活性;用峨?yún)?nèi)酯作用于四種腫瘤細胞48h后，對四種腫瘤細胞均具有顯著的抑制作用，經(jīng)計算得出，峨?yún)?nèi)酯對HEPG2、MG-63、B16、HELA四種腫瘤細胞的IC50值分別為12.24μg/ml、14.37μg/ml、43.25μg/ml和18.72μg/ml，且隨著藥物濃度的增長，藥物對腫瘤細胞的抑制率增長也十分顯著，在

5、藥物濃度為到80μg/ml時，抑制率均達到了70％以上;而異峨?yún)?nèi)酯僅對于B16細胞和MG-63細胞有較顯著的抑制作用，對于Hela細胞和HEPG2細胞幾乎無抗腫瘤作用，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)軟件計算得出異峨?yún)?nèi)酯對MG-63細胞和B16細胞的IC50值分別為34.68μg/ml和65.72μg/ml;
　　 2、DAPI染色后，熒光顯微鏡觀察到，四種細胞的生長明顯受到抑制，有明顯的細胞核斷裂和固縮，且隨著峨?yún)?nèi)酯濃度的增加，細胞凋亡現(xiàn)象更加

6、明顯，而對照組（0μg/ml）細胞完整，未見任何細胞凋亡跡象;DNAladder檢測細胞凋亡實驗中，用不同濃度峨?yún)?nèi)酯處理細胞后，藥物組均產(chǎn)生不同程度的細胞凋亡特征性DNA梯帶;
　　 3、通過對昆明小鼠給予峨?yún)?nèi)酯的急性毒性實驗實驗表明，峨?yún)?nèi)酯雖然具有較高的抗腫瘤活性，但是其急性毒性也較強，計算得出峨?yún)?nèi)酯的LD50為151.52mg/kg，其95％可信區(qū)間為93.28mg/kg-252.94mg/kg;
　　 4、

7、峨?yún)?nèi)酯高劑量、中劑量、低劑量組以及替加氟組對H22小鼠肝癌實體瘤的抑制率分別為54.39％、63.74％、56.14％、53.80％;通過免疫組化技術(shù)初步檢測給予不同藥物劑量的腫瘤組織中bax、bcl-2、P53的表達情況，初步研究表明，與模型組相比，峨?yún)?nèi)酯能顯著提高小鼠的生命延長率，峨?yún)?nèi)酯能夠上調(diào)bax的表達，降低bcl-2/bax比值，從而起到誘導(dǎo)肝癌細胞H22凋亡的作用，而各劑量組p53雖然均有一定的表達，但是各實驗組之間無