篩選類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中糖代謝關(guān)鍵基因的研究.pdf

1、目的：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一種自生免疫性疾病，主要出現(xiàn)滑膜炎癥、血管翳形成和隨后的關(guān)節(jié)損傷等病理改變。
　　糖代謝是機(jī)體內(nèi)最主要的代謝途徑之一，主要是指葡萄糖在降解的過(guò)程，包括糖酵解、有氧氧化和磷酸戊糖代謝途徑。糖酵解參與是氨基酸、脂類、核苷酸類三大代謝，并能產(chǎn)生三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate，ATP)。糖代謝不僅為機(jī)體提供能量，還通過(guò)信號(hào)通路，信號(hào)網(wǎng)絡(luò)來(lái)調(diào)節(jié)多

2、種生理過(guò)程。糖代謝在糖尿病、中風(fēng)、精神分裂癥和藥物濫用等疾病中發(fā)揮重要作用。
　　有研究表明，糖代謝包括糖酵解這一過(guò)程，在RA的發(fā)病機(jī)制和發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。有研究認(rèn)為，糖酵解活動(dòng)增強(qiáng)，在RA的發(fā)病機(jī)制中，可能發(fā)揮著重要作用。既往主要是從免疫學(xué)和遺傳學(xué)的角度進(jìn)行研究RA的相關(guān)致病機(jī)制，對(duì)于糖代謝如何參與影響RA發(fā)生發(fā)展尚無(wú)深入研究。而能否從糖代謝角度思考RA這一過(guò)程，我們的很多研究成果和最近的研究都提供了新的視角。
　　

3、PCR Array是一項(xiàng)敏感和可靠的基因表達(dá)分析技術(shù)，不僅具有實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)較好的準(zhǔn)確性和靈敏度，同時(shí)還具有微列陣的高通量?jī)?yōu)勢(shì)，可以進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、生理過(guò)程或與疾病相關(guān)的一組基因網(wǎng)絡(luò)分析。本研究利用PCRArray法檢測(cè)膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎(Collagen induced arthritis，CIA)大鼠的糖代謝相關(guān)基因，旨在檢測(cè)糖代謝的關(guān)鍵酶在RA中的表達(dá)水平改變，并闡明作用，進(jìn)一步探索糖代謝在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用.進(jìn)一步探討

4、糖代謝和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性。
　　方法:取牛Ⅱ型膠原誘導(dǎo)大鼠（CIA組）和正常對(duì)照大鼠(NCR組)膝關(guān)節(jié)滑膜組織，提取總RNA，采用Rat Glucose Metabolism RT2 ProfilerTM PCR Array篩選表達(dá)不一致基因;采用RT-PCR法對(duì)CIA組和NCR組進(jìn)行mRNA水平的檢測(cè)，采用RT-PCR法和Western blot法檢測(cè)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA組)和骨關(guān)節(jié)炎（OA組）滑膜組織中基因mRNA水平和蛋白

5、水平的表達(dá)。收集類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎血清(RAB組)和正常獻(xiàn)血者血清(NCB組)，采用ELISA法檢測(cè)血清中的表達(dá)水平。取膝關(guān)節(jié)滑膜組織原代培養(yǎng)FLS;采用人工合成的Si-RNA-PGK1干擾劑特異性抑制PGK1在RAFLS中的表達(dá)，陰性Si-RNA為陰性對(duì)照組，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染24 h后，采用RT-PCR法和Western blot法檢測(cè)抑制效率，采用CCK-8、Transwell、流式細(xì)胞術(shù)、ELISA等方法檢測(cè)干擾PGK1表達(dá)后對(duì)細(xì)胞增殖、侵襲、

6、遷移、細(xì)胞周期和相關(guān)炎性因子分泌的影響。
　　結(jié)果:PCR Array檢測(cè)顯示，CIA組烯醇化酶(ENO1)、己糖激酶2（HK2）、磷酸甘油酸激酶-1(PGK1)較NCR組表達(dá)上調(diào)（P＜0.05），磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶-1(PCK1)和丙酮酸脫氫酶激酶-4(PDK4)表達(dá)下調(diào)(P＜0.05);RT-PCR法和Western blot法檢測(cè)顯示，RA組和OA組相比， ENO1和PGK1表達(dá)上調(diào)（P＜0.05），ELISA法檢測(cè)結(jié)果

7、顯示，RAB組和NCB組相比，PGK1表達(dá)升高(P＜0.05）。轉(zhuǎn)染特異性Si-RNA-PGK1后，各干擾組與陰性對(duì)照組相比，Si-RNA-PGK1干擾劑轉(zhuǎn)染24 h時(shí)，PGK1 mRNA水平抑制效果顯著（P＜0.05），RAFLS的增殖受到抑制（P＜0.05），細(xì)胞的侵襲能力下降(P＜0.05)，IFN-γ和IL-1β分泌降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論:牛Ⅱ型膠原誘導(dǎo)大鼠和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜組織中糖代謝關(guān)鍵酶ENO1和PGK1表