唑來(lái)膦酸對(duì)頜骨影響的組織學(xué)觀察.pdf

1、目的：雙膦酸鹽類藥物在治療骨質(zhì)疏松和惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移方面取得顯著成果，但隨著該類藥物的廣泛應(yīng)用，雙膦酸鹽性頜骨壞死(BRONJ)作為不良反應(yīng)之一，在國(guó)際上引起了廣泛的注意，但其機(jī)制尚不明確。本研究觀察SD大鼠在應(yīng)用唑來(lái)膦酸后下頜骨的組織學(xué)改變，探究雙膦酸鹽性頜骨壞死發(fā)生前頜骨組織形態(tài)學(xué)的變化,為進(jìn)一步研究雙膦酸鹽性頜骨壞死提供基本數(shù)據(jù)和研究基礎(chǔ)，為臨床預(yù)防和治療提供理論指導(dǎo)。
　　方法：選擇健康3月齡的雌性SD大鼠36只，體重220

2、±20g，自由攝食水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為3組，每組12只。A組（單純應(yīng)用唑來(lái)膦酸組）:唑來(lái)膦酸經(jīng)腹腔注射，濃度0.1mg/ml，劑量0.2mg/kg，每?jī)商煲淮危掷m(xù)8周。生理鹽水按照每100g體重0.5mL灌胃，每日一次，持續(xù)8周。B組（唑來(lái)膦酸聯(lián)合鈣劑組）：唑來(lái)膦酸經(jīng)腹腔注射，濃度0.1mg/ml，劑量0.2mg/kg，每?jī)商煲淮危掷m(xù)8周。將濃度0.84％鈣爾奇（碳酸鈣+維生素D）混懸液按照每100g體重0.5mL灌胃，每日

3、一次，持續(xù)8周。C組（對(duì)照組）：按照 SD大鼠體重2ml/kg腹腔注射無(wú)菌生理鹽水，每?jī)商煲淮?，持續(xù)8周。生理鹽水按照每100g體重0.5mL灌胃，每日一次，持續(xù)8周。8周后，三組動(dòng)物均停藥，每組12只大鼠再隨機(jī)分為拔牙組（3只）和非拔牙組（9只），所有動(dòng)物均存活，在處死前無(wú)異常表現(xiàn)及不良反應(yīng)。拔牙組：在10%水合氯醛全麻下拔除SD大鼠左側(cè)下頜第一臼齒，而后繼續(xù)飼養(yǎng)4周處死取下頜骨。非拔牙組：在用藥開始后的第8周、10周、12周時(shí)分別將

4、每組SD大鼠隨機(jī)處死3只，取大鼠下頜骨。所有標(biāo)本置于10%甲醛溶液中固定48小時(shí)，經(jīng)流水漂洗24小時(shí)，PBS緩沖液(0.01mol/L，PH=7.4)漂洗3min后，置于10%乙二胺四乙酸二鈉溶液中脫鈣，每?jī)商旄鼡Q一次脫鈣液，期間每天充分震蕩。脫鈣1個(gè)半月后，流水漂洗24小時(shí)，10%甲醛溶液固定30mim，乙醇逐級(jí)脫水，浸蠟，常規(guī)石蠟包埋，沿矢狀位制作厚度為4μm的組織切片，HE染色進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察，并使用計(jì)算機(jī)醫(yī)學(xué)數(shù)碼病理圖像分析系

5、統(tǒng)Med6.0進(jìn)行骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)檢測(cè)。使用免疫組化方法，對(duì)下頜骨血管的內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)進(jìn)行檢測(cè)，并用專業(yè)圖像分析軟件Image-pro plus6.0測(cè)量VEGF平均光密度值(IOD)。
　　使用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，所有計(jì)量資料數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((-x)±s)的形式表示，每項(xiàng)指標(biāo)的各組數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性及方差齊性檢驗(yàn)，服從正態(tài)分布和方差齊性(Homogeneity of variance)，各組數(shù)據(jù)采用析因

6、設(shè)計(jì)方差分析，兩兩比較采用SNK(Student-Newman-Keuls)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.大體觀察:A、B、C組中非拔牙組的SD大鼠在8周、10周、12周時(shí)，下頜磨牙區(qū)牙齦無(wú)紅腫及出血，無(wú)滲出物及瘺道，下頜骨無(wú)死骨暴露。A、B、C組中拔牙組SD大鼠在拔牙后4周時(shí)，拔牙創(chuàng)愈合情況出現(xiàn)差異，A組大鼠拔牙創(chuàng)愈合差，周圍牙齦破潰，紅腫；B組拔牙創(chuàng)愈合較差，牙齦色紅，A、

7、B組均未見死骨暴露；C組SD大鼠拔牙創(chuàng)愈合良好，軟組織無(wú)紅腫，無(wú)出血。
　　2.組織學(xué)觀察:開始用藥后8周：A組根尖周圍可見炎性浸潤(rùn)，骨小梁排列紊亂，炎性細(xì)胞密集，主要為中性粒細(xì)胞，多核巨細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，漿細(xì)胞等，其間分布的毛細(xì)血管，部分骨小梁破壞吸收，未見死骨形成，其范圍主要局限在根尖周圍，牙周膜和其它部位未見明顯炎性浸潤(rùn)；非根尖區(qū)骨小梁粗大，連接成網(wǎng)狀，骨髓間隙小，骨密質(zhì)較厚。B組：根尖區(qū)域亦可見炎性浸潤(rùn)，但較 A組范圍小，骨

8、小梁周圍分布大量淋巴細(xì)胞，漿細(xì)胞，中性粒細(xì)胞等，部分骨小梁破壞吸收；非根尖區(qū)域骨小梁排列緊密且規(guī)律，連接成網(wǎng)狀。C組：根尖區(qū)骨小梁排列規(guī)律，骨小梁較細(xì)，骨髓間隙大，骨小梁連接成網(wǎng)狀，根尖下方無(wú)明顯的炎性浸潤(rùn)，骨小梁無(wú)破壞吸收，沒有形成明顯炎性浸潤(rùn)區(qū)，牙周膜周圍無(wú)炎性細(xì)胞分布。
　　開始用藥后10周：A和B組根尖周圍仍可見大范圍的炎性浸潤(rùn)，范圍較8周時(shí)增大。炎性浸潤(rùn)區(qū)中性粒細(xì)胞，漿細(xì)胞和淋巴細(xì)胞更加密集，浸潤(rùn)區(qū)骨小梁排列紊亂，骨小梁

9、破壞吸收明顯，未見死骨形成，散在分布著毛細(xì)血管。但B組炎性浸潤(rùn)范圍較A組局限。非根尖區(qū)內(nèi)骨小梁粗大，骨髓間隙小，骨小梁排列規(guī)律，無(wú)破壞吸收，牙周膜周圍無(wú)炎性細(xì)胞分布。C組：根尖區(qū)骨小梁排列規(guī)律，根尖下方可見散在炎性細(xì)胞分布，骨小梁無(wú)破壞吸收，周圍區(qū)域和牙周膜未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　開始用藥后12周：A、B組中根尖區(qū)可見大范圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，骨小梁破壞溶解程度高于10周，骨小梁排列紊亂，未見死骨形成，炎性浸潤(rùn)范圍A組大于B組。非根尖區(qū)

10、骨小梁排列緊密，骨小梁粗大，連接成網(wǎng)狀或片狀，骨髓間隙小，牙周膜周圍無(wú)炎性細(xì)胞分布。C組中骨小梁排列規(guī)則，連接成片，根尖周圍區(qū)無(wú)明顯炎性浸潤(rùn)區(qū)，骨小梁粗大，無(wú)破壞吸收，牙周膜周圍無(wú)炎性細(xì)胞分布。
　　開始用藥后12周拔牙組：拔牙后A、B組根尖區(qū)炎性浸潤(rùn)范圍較12周非拔牙組變大，拔牙創(chuàng)內(nèi)未見新生的骨小梁，根尖區(qū)炎性細(xì)胞更加密集，范圍更廣，骨小梁破壞吸收更明顯，但未見死骨形成。C組拔牙窩可見不成熟的骨小梁，排列疏松，骨小梁纖細(xì)，連接成

11、網(wǎng)狀。根尖區(qū)可見少許炎性細(xì)胞分布，骨小梁排列規(guī)律，無(wú)破壞吸收，與12周未拔牙的C組根尖區(qū)比較無(wú)明顯差異。
　　3.骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)檢測(cè)
　　3.1下頜骨的骨密質(zhì):開始用藥后8周、10周、12周大鼠下頜骨骨密質(zhì)厚度比較，組別和時(shí)間的相互作用經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)交互作用。下頜骨骨密質(zhì)各組間比較結(jié)果：C組　　3.2下頜

12、骨根尖區(qū)的骨松質(zhì):開始用藥后8周、10周、12周下頜骨根尖區(qū)骨松質(zhì)骨小梁面積、骨小梁周長(zhǎng)、骨小梁寬度和炎性浸潤(rùn)程度比較，組別和時(shí)間的相互作用經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)交互作用。不同組別間下頜骨根尖區(qū)骨松質(zhì)的骨小梁面積和骨小梁周長(zhǎng)結(jié)果比較：A組

13、>B組>C組，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，A組和B組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異， A組和C組之間、B組和C組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。用藥后8周、10周、12周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)下頜骨根尖區(qū)骨松質(zhì)骨小梁面積、骨小梁周長(zhǎng)、骨小梁寬度和炎性浸潤(rùn)比較無(wú)顯著性差異。
　　開始用藥12周后，拔牙組與非拔牙組下頜骨根尖區(qū)的骨松質(zhì)骨小梁面積、骨小梁周長(zhǎng)、骨小梁寬度和炎性浸潤(rùn)比較，組別和是否拔牙的相互作用經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)交互作用。不同組別間下頜骨根尖區(qū)的骨松質(zhì)骨小梁面積、骨小梁周長(zhǎng)、骨小

14、梁寬度比較結(jié)果：A組　　3.3下頜骨非

15、根尖區(qū)的骨松質(zhì):開始用藥后8周、10周、12周下頜骨非根尖區(qū)的骨松質(zhì)骨小梁面積、骨小梁周長(zhǎng)、骨小梁寬度比較，組別和時(shí)間的相互作用經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)交互作用。各組間下頜骨非根尖區(qū)的骨松質(zhì)骨小梁面積、骨小梁周長(zhǎng)的比較結(jié)果：C組

16、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，10周與12周之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，8周與10周、8周與12周之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。骨小梁周長(zhǎng)：C8　　4.下頜骨血管VEGF的平均光密度值:開始用藥后8周、10周、12周三組大鼠下頜骨血管VE

17、GF平均光密度值的比較，對(duì)組別和時(shí)間的相互作用經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有交互作用。各組間下頜骨血管VEGF的平均光密度值比較：A組　　開始用藥后12周時(shí)，拔牙組與非拔牙組下頜骨血管VEGF的平均光密度值比較結(jié)果：對(duì)組別和是否拔牙的相

18、互作用經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有交互作用。拔牙組與非拔牙組間下頜骨血管中 VEGF的平均光密度值比較：拔牙組 VEGF的平均光密度值高于非拔牙組，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，兩組之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。各組間下頜骨血管中VEGF的平均光密度值比較：A組　　結(jié)論：
　　1.全身應(yīng)用唑來(lái)膦酸對(duì)大鼠下頜骨的組織形態(tài)是有影響的，下頜骨的骨密質(zhì)厚度增加，非根尖區(qū)骨松質(zhì)的骨密度增加，而根尖區(qū)骨松質(zhì)的骨小梁排列紊亂，骨