MeJA對猴頭5L0433菌株麥角甾醇合成的影響及消減文庫的ESTs分析.pdf

1、本研究以猴頭(Hericium erinaceus Pers.)菌絲體為實驗材料,建立了猴頭菌絲體液體搖瓶培養(yǎng)產麥角甾醇最佳調控方法。并利用抑制性消減雜交技術(Suppression subtractive hybridization,SSH)構建了猴頭菌絲體正向消減文庫。從消減文庫中篩選特異基因片段并進行初步的生物信息學分析。主要研究結果如下:
　　 1、建立了MeJA誘導猴頭5L0433菌絲體生產麥角甾醇技術：
　　

2、 猴頭菌液體發(fā)酵培養(yǎng)產麥角甾醇可以利用以下培養(yǎng)技術來提高麥角甾醇的生產量:培養(yǎng)基:麥芽糖20g,磷酸二氫鉀3g,硫酸鎂1.5g,酵母提取物10g,水1000ml,pH自然。接種后,25℃靜止培養(yǎng)2d,25℃,150r/min震蕩培養(yǎng)8天后加入無菌50μmol·L-1MeJA,誘導第11天收獲菌絲,麥角甾醇生產量達到最大值1.882mg/100ml。
　　 2、MeJA對猴頭5L0433麥角甾醇合成的影響：
　　 MeJA

3、(茉莉酸甲酯)誘導子促進麥角甾醇的積累研究揭示:MeJA誘導子的添加對猴頭液體發(fā)酵培養(yǎng)菌絲體的生長、麥角甾醇的含量、生長量體現(xiàn)了一定的促進作用。綜合菌絲產率和麥角甾醇含量確定了使用50pmol·L-1最佳MeJA濃度對猴頭菌絲體進行誘導。在MeJA誘導第8d時菌絲產量最高為0.96g/100ml。MeJA在10μmol·L-1、50μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1濃度條件下,50μmol·L-1和100μ

4、mol·L-1菌絲體產率分別為0.31g/100ml和0.33g/100ml,顯著高于對照(0.27g/100ml)。MeJA濃度為50μmol·L-1時,干菌絲麥角甾醇含量最大為1.603mg·g-1,是對照(1.260mg·g-1)的1.27倍。
　　 3、消減文庫特異基因片段初步生物信息學分析：
　　 成功構建了MeJA誘導下猴頭正向消減文庫。應用BLAST軟件將消減文庫篩選到的特異基因ESTs片段序列與GenBa

5、nk中序列進行同源性比對,同時運用COG功能分類及GO功能分類對序列進行了初步的生物信息學分析。在正向文庫MhmrA進行GO功能分類的結果表明,文庫中細胞組件功能包含有細胞、細胞器、蛋白質復合體這三類。文庫中分子功能包含有抗氧化活性、催化活性、信號轉導活性、翻譯調控活性等,文庫中生物學途徑功能包含細胞程序、生理過程、生化過程的調控、對刺激的反應這四類。在正向文庫MhmrA進行COG功能分類的結果表明,從各種功能基因的片段所占比例來看,G