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文檔簡介
1、目的:
探究神經系統(tǒng)中H3K9me3的表達與高糖代謝記憶現(xiàn)象的相關性。
方法:
一、高劑量STZ造模1型糖尿病小鼠,利用胰島素控制血糖的方法制備高糖代謝記憶模型,利用Western blot檢測腦皮質和海馬組織中H3K9me3以及甲基化轉移酶SUV39H1的表達。
二、在三種神經細胞模型中(神經前體細胞、神經元、HT22細胞系),給予高糖刺激不同時間,利用Western blot檢測H3K9me3
2、以及甲基化轉移酶SUV39H1對高糖刺激的敏感性。
三、在三種神經細胞模型中,給予高糖刺激不同時間后,撤除高糖刺激后制備代謝記憶模型,檢測Western blot檢測H3K9me3以及甲基化轉移酶SUV39H1的表達并利用免疫熒光的方法,檢測H3K9me3在HT22的表達。
四、體外培養(yǎng)的HT22細胞中,研究高糖代謝記憶與異染色質結構改變的相關性。
?。?)利用Western blot檢測高糖刺激以及撤除高糖
3、刺激后的H3K9me3和異染色質蛋白HP1的表達。
?。?)利用Real-Time PCR法檢測高糖刺激以及撤除高糖刺激后,大衛(wèi)星DNA的相對表達量。
(3)利用qChIP法檢測高糖刺激以及撤除高糖刺激后,大衛(wèi)星DNA區(qū)域中H3K9me3的相對占有率。
五、在HT22細胞高糖代謝記憶模型中,利用XFe/XF24分析儀和細胞線粒體壓力試劑盒檢測細胞能量代謝水平(OCR值),分析高糖代謝記憶與細胞能量代謝的關系。
4、
結果:
?。?)糖尿病小鼠大腦中H3K9me3表達升高,在胰島素控制高糖血癥一周后的代謝記憶組H3K9me3的表達量仍高于正常對照組,并且與糖尿病組H3K9me3的表達相近;
?。?)在三種神經細胞模型中,H3K9me3的表達均對高糖刺激敏感,在短時間內H3K9me3表達量迅速升高至峰值;撤除高糖刺激后,H3K9me3的高表達現(xiàn)象維持一定的時間,即記憶現(xiàn)象。
?。?)在HT22細胞高糖代謝記憶模型中,
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