培土生金法對COPD大鼠膈肌細胞增殖與凋亡的影響及臨床應(yīng)用.pdf

1、目的:
　　1.介紹導(dǎo)師治療慢性阻塞性肺疾病的學(xué)術(shù)思想和臨證經(jīng)驗，總結(jié)其用藥規(guī)律及臨證化裁。
　　2.觀察不同濃度培土生金法中藥對COPD模型大鼠體重，肺與膈肌組織形態(tài)學(xué)、動脈血氣(PH、PO2、PCO2)、膈肌細胞凋亡率、增殖率與凋亡率的比值、細胞凋亡途徑（Fas、FasL、Bax、Bcl-2）、核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NP-κBP65)的影響，試從膈肌細胞增殖與凋亡角度探討培土生金法對COPD膈肌結(jié)構(gòu)的保護作用，并從細胞凋亡途

2、徑及NP-κB通路探討該治法在調(diào)節(jié)膈肌細胞增殖/凋亡平衡方面的作用及機制，為臨床辯證應(yīng)用培土生金法防治COPD提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　1.通過仔細閱讀導(dǎo)師多年來發(fā)表論文、學(xué)術(shù)講稿，以及收集學(xué)生跟診過程中導(dǎo)師對慢阻肺的辨證論治、遣方用藥，整理總結(jié)孫志佳教授治療慢阻肺的學(xué)術(shù)思想、辨證思路和處方規(guī)律。
　　2.取Wistar大鼠為研究對象，采用氣管內(nèi)注入脂多糖(LPS)聯(lián)合香煙煙熏法建立COPD大鼠模型，觀察不同濃度

3、培土生金法方藥對大鼠一般情況，體重的影響。通過HE染色鏡下觀察大鼠肺和膈肌的組織形態(tài)學(xué)改變，結(jié)合動脈血氣分析(PH、PO2、PCO2)共同評估COPD大鼠模型建立情況和培土生金法對COPD大鼠整體保護作用。
　　3.通過免疫組化法檢測PCNA在膈肌中的表達，并計算增殖指數(shù)(PI)，采用TUNEL方法檢測膈肌細胞凋亡情況，并計算凋亡指數(shù)(AI)及PI/AI值，評估COPD大鼠膈肌細胞增殖/凋亡平衡情況和培土生金法對其影響。
　

4、　4.通過免疫組化法檢測細胞凋亡途徑相關(guān)蛋白Fas、FasL、Bax、Bcl-2及NF-κB通路相關(guān)蛋白P65在膈肌中的表達，并采用RT-PCR技術(shù)檢測NF-κBP65mRNA的表達，擬從細胞增殖與凋亡角度探討培土生金法對COPD的治療療效和對膈肌保護作用的作用機制。
　　結(jié)果:
　　1.導(dǎo)師孫志佳教授治療慢阻肺的學(xué)術(shù)思想可概括為3點:辨別虛實，治病求本，尤重脾土;審明疾病階段及病在何臟，重視臟腑相關(guān);注重體質(zhì)，防病傳變。臨

5、證導(dǎo)師應(yīng)用培土生金法代表方六君子湯的基礎(chǔ)上多有發(fā)揮:做到分期辨治，急則治標，以祛邪為主，重清熱行氣，兼顧痰、瘀，不禁猛藥;穩(wěn)定治本，補虛為主，尤重培土生金;同時注意生活飲食調(diào)攝，增強肺康復(fù)鍛煉。導(dǎo)師臨證應(yīng)用六君子湯基礎(chǔ)上多有發(fā)揮，臨床療效顯著，進一步總結(jié)出導(dǎo)師培土生金基礎(chǔ)方進行下一步實驗驗證。
　　2.COPD大鼠模型復(fù)制成功，肉眼觀察COPD模型組出現(xiàn)肺臟色暗紅偏紫，無光澤，有些夾蒼白色，肺體積增大;HE染色觀察肺組織有明顯氣道

6、炎癥，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺皰腔擴大等表現(xiàn);膈肌組織出現(xiàn)不同程度的膈肌纖維排列紊亂、間隙增寬，部分出現(xiàn)膈肌纖維斷裂、溶解等。培土生金法能改善上述COPD肺和膈肌組織結(jié)構(gòu)的破壞。
　　3.COPD模型組大鼠體重及動脈PO2明顯低于空白組，PCO2明顯高于空白組;而培土生金法高劑量中藥能明顯升高COPD大鼠體重，同時增加動脈血PO2，降低PCO2。
　　4.COPD模型組大鼠膈肌細胞凋亡指數(shù)(AI)明顯高于空白組，增殖指數(shù)與凋亡指數(shù)的

7、比值(PI/AI)明顯低于空白組;培土生金法中藥高劑量方藥能降低大鼠膈肌AI，同時能增高PI/AI。
　　5.COPD模型組大鼠膈肌組織Fas、FasL、Bax、及NF-κBP65蛋白表達升高，Bcl-2蛋白表達降低;培土生金法能明顯降低Fas、FasL、Bax、及NF-κBP65蛋白的表達，同時能升高Bcl-2蛋白表達。NF-κBP65mRNA基因在空白組、模型組、中藥組中的表達未見明顯差異。
　　結(jié)論:
　　1.導(dǎo)

8、師孫志佳教授治療COPD注重辨別虛實及疾病所處階段，尤重脾土對COPD發(fā)病及治療的關(guān)鍵作用，同時兼顧各臟腑之間的整體聯(lián)系，關(guān)注個體體質(zhì)對COPD傳變的重要意義?；谝陨媳孀C思想，導(dǎo)師提出COPD的治療急性期以祛邪為主，重清熱行氣，兼顧痰瘀，用藥應(yīng)效專力宏，不能過于拘泥于老年體虛而妄用滋補;穩(wěn)定期以補虛為主，尤重培土生金。注意情志疏導(dǎo)與飲食調(diào)控相結(jié)合，加強氣息鍛煉、傳統(tǒng)功法等肺康復(fù)訓(xùn)練。
　　2.培土生金法能減輕COPD大鼠肺和膈肌

9、組織的損傷，改善大鼠體重、精神、活動度，呼吸道癥狀等整體狀態(tài)。
　　3.培土生金法能有效改善COPD大鼠低氧血癥和高碳酸血癥發(fā)展趨勢，提高肺通氣和換氣功能，改善呼吸功能。
　　4.培土生金法能通過抑制Fas/FasL死亡受體途徑和線粒體途徑相關(guān)蛋白在膈肌的表達，減少膈肌細胞的凋亡，從而起到對COPD膈肌的保護和呼吸功能的改善作用。
　　5.培土生金法能通過抑制NF-κB通路關(guān)鍵蛋白P65的表達減少膈肌細胞的凋亡，維持膈