基于Akt-mTOR通路的白藜蘆醇抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細胞凋亡機理研究.pdf

1、本研究采用細胞培養(yǎng)、臺盼藍染色、DAPI和TUNEL染色、RNA干擾、Western blot分析等細胞分子生物學(xué)技術(shù)和方法，以PC12細胞和小鼠原代神經(jīng)元為實驗對象，研究了白藜蘆醇對鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細胞凋亡的影響，深入探討白藜蘆醇靶向mTOR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細胞凋亡和S6K1在此過程的重要作用。結(jié)果如下:
　　1 白藜蘆醇通過抑制Akt/mTOR通路抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細胞凋亡
　　PC12細胞和小鼠原代神經(jīng)元用白藜蘆醇（100μM

2、）預(yù)處理1h后暴露于鎘（10和20μM）8h或24h。Western blot分析Akt/mTOR通路相關(guān)蛋白表達;臺盼藍和DAPI染色分別分析活細胞數(shù)量和凋亡細胞表現(xiàn)。結(jié)果顯示:鎘以濃度依賴的方式誘導(dǎo)神經(jīng)細胞Akt、mTOR、S6K1、S6、4E-BP1磷酸化增加，這被白藜蘆醇有力地阻滯;與之一致的，白藜蘆醇顯著減低鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細胞活性下降和凋亡。這些結(jié)果表明白藜蘆醇抑制Akt/mTOR通路抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細胞凋亡。
　　2 白藜蘆醇

3、靶向mTOR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細胞凋亡
　　以PC12細胞和小鼠原代神經(jīng)元為實驗對象，細胞用雷帕霉素(200ng/ml)預(yù)處理48h后再用白藜蘆醇（100μM）預(yù)處理1h，接著暴露于鎘（10μM）8h或24h。Western blot分析相關(guān)蛋白表達;臺盼藍和TUNEL染色分別分析活細胞數(shù)量和凋亡細胞表現(xiàn)。結(jié)果顯示:雷帕霉素強化白藜蘆醇抑制鎘誘導(dǎo)Akt、mTOR、S6K1、4E-BP1磷酸化和Cleaved-caspase-3增

4、加;與之一致的，雷帕霉素也有效增強白藜蘆醇抵抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細胞活性下降以及TUNEL陽性細胞升高。這些結(jié)果表明白藜蘆醇靶向mTOR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細胞凋亡。
　　3 S6K1在白藜蘆醇抗鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細胞凋亡中有重要作用
　　分別感染Ad-S6K1-ca和Ad-LacZ（作為對照）的PC12細胞用白藜蘆醇(100μM)或PP242（1μM）預(yù)處理1h后暴露于鎘（10μM）8h或24h。Western blot分析相關(guān)蛋白表達;