鹽酸氨基葡萄糖聯(lián)合阿倫磷酸鈉應(yīng)用于兔膝骨關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究鹽酸氨基葡萄糖(glucosamine hydrochloride,GH)聯(lián)合阿侖膦酸鈉(Alendronate,ALN)對(duì)前交叉韌帶切斷兔膝骨性關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)軟骨和軟骨下骨的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。
　　 方法:40只3月齡新西蘭大白兔隨機(jī)分為4組,每組10只:假手術(shù)(Sham)組;右膝關(guān)節(jié)前交叉韌帶切斷(anterior cruciate ligamenttransaction,ACLT)加鹽水治療(ACLT+NS)

2、組;前交叉韌帶切斷術(shù)后鹽酸氨基葡萄糖治療(ACLT+GH)組;前交叉韌帶切斷術(shù)后阿侖膦酸鈉+鹽酸氨基葡萄糖聯(lián)合治療(ACLT+GH+ALN)組。除Sham組外,其余30只動(dòng)物接受右側(cè)前交叉韌帶切斷手術(shù),Sham組10只動(dòng)物暴露關(guān)節(jié)面,但不切斷韌帶。術(shù)后前交叉韌帶切斷+鹽酸氨基葡萄糖組動(dòng)物給予GH(100mg/kg/d),前交叉韌帶切斷+鹽酸氨基葡萄糖+阿侖膦酸鈉組動(dòng)物給予GH同時(shí),皮下注射阿侖膦酸鈉(10μg/kg/d),連續(xù)6周;前交

3、叉韌帶切斷+NS組動(dòng)物給予等劑量生理鹽水皮下注射,每日一次,連續(xù)6周。給藥后6周處死所有動(dòng)物,解剖膝關(guān)節(jié),肉眼大體觀察膝關(guān)節(jié)外觀,取脛骨去除軟骨后行軟骨下骨生物力學(xué)檢測(cè),測(cè)定最大載荷和彈性模量,取股骨測(cè)量遠(yuǎn)端1/4骨密度后,脫鈣、包埋、制備膝關(guān)節(jié)組織切片行HE染色以及MMP-13(matrix metalloproteinase-13)免疫組織化學(xué)檢測(cè)。HE染色切片按照“Mankin評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)”進(jìn)行評(píng)價(jià)。MMP-13免疫組織化學(xué)切片用圖像

4、分析儀軟件Imagepro-Plus測(cè)量累積光密度值(integrated optical density,IOD)。
　　 結(jié)果:1.大體觀察:Sham組膝關(guān)節(jié)面正常;前交叉韌帶切斷+鹽水組膝關(guān)節(jié)面光澤暗淡,滑液混濁,有關(guān)節(jié)面破壞、潰瘍及骨贅形成;前交叉韌帶切斷+鹽酸氨基葡萄糖組及前交叉韌帶切斷+鹽酸氨基葡萄糖+阿侖膦酸鈉組膝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)亦有一定的骨性關(guān)節(jié)炎的表現(xiàn),但程度較前交叉韌帶切斷+鹽水組明顯減輕。2.Mankin評(píng)分:前交

5、叉韌帶切斷+鹽水組顯著高于Sham組,前交叉韌帶切斷+鹽酸氨基葡萄糖組、前交叉韌帶切斷+鹽酸氨基葡萄糖+阿侖膦酸鈉組顯著低于前交叉韌帶切斷+鹽水組,但仍高于Sham組。(Sham:1.57±0.52;ACLT+NS:6.90±1.52;ACLT+GH:5.13±1.77;ACLT+GH+ALN:3.20±0.96)3.MMP-13免疫組化檢測(cè)結(jié)果:前交叉韌帶切斷+鹽水組MMP-13的表達(dá)水平顯著高于Sham組,前交叉韌帶切斷+鹽酸氨基葡

6、萄糖組、前交叉韌帶切斷+鹽酸氨基葡萄糖+阿侖膦酸鈉組MMP-13的表達(dá)顯著低于前交叉韌帶切斷+鹽水組。(Sham:4311.17±589.32;ACLT+NS:27839.86±2944.04;ACLT+GH:132511.56±1501.01;ACLT+GH+ALN:7906.80±800.60)。4.股骨遠(yuǎn)端BMD:前交叉韌帶切斷+鹽水組顯著低于Sham組,前交叉韌帶切斷+鹽酸氨基葡萄糖+阿侖膦酸鈉組最高,與前交叉韌帶切斷+鹽水組、

7、前交叉韌帶切斷+鹽酸氨基葡萄糖組差別顯著。(Sham:0.3014±0.0148;ACLT+NS:0.2833±0.0128;ACLT+GH:0.2923±0.0104;ACLT+GH+ALN:0.3131±0.0129)。5.生物力學(xué)檢測(cè)結(jié)果:最大載荷、彈性模量:前交叉韌帶切斷+鹽水組、前交叉韌帶切斷+鹽酸氨基葡萄糖組均顯著低于Sham組;Sham組與前交叉韌帶切斷+鹽酸氨基葡萄糖+阿侖膦酸鈉組無(wú)顯著差別。(最大載荷:Sham:424

8、.63±19.22;ACLT+NS:350.12±15.98;ACLT+GH:361.67±17.29;ACLT+GH+ALN:427.85±25.44;彈性模量:Sham:226.32±12.21;ACLT+NS:187.49±20.31;ACLT+GH:197.06±14.40;ACLT+GH+ALN:235.34±12.63)
　　 結(jié)論:1.前交叉韌帶切斷術(shù)后6周可造成兔膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎模型,表現(xiàn)為關(guān)節(jié)軟骨的退變及軟骨下

9、骨骨量下降、力學(xué)性能改變。2.鹽酸氨基葡萄糖可改善前交叉韌帶切斷兔膝骨性關(guān)節(jié)炎,其作用機(jī)制與降低MMP-13的表達(dá)有關(guān)。3.鹽酸氨基葡萄糖與阿侖膦酸鈉聯(lián)合用藥可通過(guò)調(diào)節(jié)軟骨及軟骨下骨代謝的雙重作用,抑制前交叉韌帶切斷術(shù)后兔膝骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)展:即下調(diào)前交叉韌帶切斷兔膝關(guān)節(jié)軟骨MMP-13的表達(dá)抑制軟骨基質(zhì)降解的同時(shí),維持軟骨下骨骨量及其力學(xué)性能,從而改善前交叉韌帶切斷兔膝關(guān)節(jié)軟骨的力學(xué)環(huán)境。因此,鹽酸氨基葡萄糖與阿侖膦酸鈉聯(lián)合用藥治療兔膝