光譜法研究血清白蛋白及殼聚糖與染料的相互作用及分析應(yīng)用.pdf

1、熒光分析法具有靈敏度高、選擇性好、試樣量少和方法簡(jiǎn)單等特點(diǎn)已成為一種常見的物質(zhì)定性定量分析方法。本文研究了蛋白質(zhì)與多種染料的相互作用及它們的光譜特征。并以計(jì)算結(jié)果闡釋了熒光猝滅的類型，染料與蛋白質(zhì)的作用力類型。并計(jì)算了體系的結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)和結(jié)合距離等有關(guān)參數(shù)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)染料與蛋白質(zhì)作用后，其熒光猝滅程度與染料濃度呈線性關(guān)系，據(jù)此可建立分析測(cè)定染料的新方法；當(dāng)改變實(shí)驗(yàn)條件時(shí)蛋白質(zhì)與某些染料作用會(huì)導(dǎo)致染料熒光增強(qiáng)，其增強(qiáng)值與蛋白質(zhì)的濃度

2、呈正比，于是可建立分析測(cè)定蛋白質(zhì)的新方法。 共振瑞利散射(RRS)法是近年來發(fā)展起來的操作簡(jiǎn)便、靈敏度高的分子光譜分析方法。目前RRS法已經(jīng)廣泛用于生物大分子分析、無機(jī)物和藥物分析、痕量無機(jī)離子的測(cè)定和納米離子的表征等方面的研究。我們將它應(yīng)用于糖類物質(zhì)的分析，建立了測(cè)定殼聚糖的RRS新方法，并研究了實(shí)驗(yàn)的條件和影響因素。方法用于殼聚糖的實(shí)際樣品測(cè)定，結(jié)果令人滿意，并與其它方法比較有更高的靈敏度和選擇性。 1 蛋白質(zhì)-吩嗪

3、類染料體系在pH 7.4的Tris-HCl緩沖介質(zhì)中牛血清白蛋白(BSA)及人血清白蛋白(HSA)與酚藏花紅(PS)、中性紅(NR)和番紅花紅(ST)吩嗪類染料發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。三種染料均導(dǎo)致了蛋白質(zhì)的熒光猝滅，其熒光猝滅值與染料濃度成正比，可以蛋白質(zhì)為探針，測(cè)定某些染料。由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得到不同溫度下的動(dòng)態(tài)猝滅常數(shù)和靜態(tài)猝滅結(jié)合常數(shù)、反應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù)和結(jié)合位點(diǎn)數(shù)。根據(jù)Fǒster能量轉(zhuǎn)移原理計(jì)算出了三種染料與血清白蛋白20℃時(shí)的結(jié)合距離。同時(shí)研

4、究了在pH 9.5的Tris-HCl緩沖溶液中蛋白質(zhì)對(duì)Ps熒光的增強(qiáng)作用。根據(jù)Ps熒光增強(qiáng)程度與蛋白質(zhì)濃度的線性關(guān)系，可用于蛋白質(zhì)的含量測(cè)定。研究了牛血清白蛋白與中性紅的三維熒光光譜，表明二者發(fā)生了能量轉(zhuǎn)移，BSA將部分能量轉(zhuǎn)移給NR，導(dǎo)致BSA的熒光猝滅。 2 蛋白質(zhì)-二苯基奈基甲烷類染料體系用熒光光譜、同步熒光光譜和紫外吸收光譜法研究了BSA及HSA與維多利亞藍(lán)(VB)、維多利亞藍(lán)B(VBB)、維多利亞藍(lán)4R(VB4R)等二

5、苯基萘基甲烷類染料相互作用及光譜特征。結(jié)果表明染料與蛋白質(zhì)的反應(yīng)導(dǎo)致了蛋白質(zhì)的熒光猝滅，其熒光猝滅值與VB、VBB、VB4R的濃度呈正比。用Stem-Volmer方程和Lineweaver-Burk雙倒數(shù)函數(shù)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，得到不同溫度下的動(dòng)態(tài)猝滅常數(shù)和靜態(tài)猝滅結(jié)合常數(shù)、反應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù)和結(jié)合位點(diǎn)數(shù)。根據(jù)Fǒster能量轉(zhuǎn)移原理計(jì)算出了三種染料與血清白蛋白的結(jié)合距離。 3 殼聚糖-金屬離子-蛋白質(zhì)體系在pH 6.5的Britton

6、-Robinson(BR)緩沖溶液中，HSA、銅離子和殼聚糖反應(yīng)后形成三元復(fù)合物，導(dǎo)致體系的散射光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。最大散射峰位于470 nm左右，而位于305～340 nm左右的散射峰強(qiáng)度最為穩(wěn)定。在0.01～4.0μg/mL范圍內(nèi)散射強(qiáng)度與殼聚糖濃度呈線性關(guān)系。方法靈敏度高，檢測(cè)限為3.7 ng/mL。該方法用于海蝦、蟹等實(shí)際樣品及膠囊中含量測(cè)定，結(jié)果滿意。 4 殼聚糖-四碘熒光素體系在pH 4.0的BR緩沖溶液中，四碘熒光素與