自體骨髓干細(xì)胞移植聯(lián)合脾臟切除門奇斷流術(shù)影響肝儲(chǔ)備功能的臨床研究.pdf

1、背景：
　　肝硬化是臨床上常見(jiàn)的慢性進(jìn)行性肝臟疾病，表現(xiàn)為慢性肝炎等多種因素引起肝小葉破壞而纖維組織增生取代了正常的肝組織。肝硬化晚期常出現(xiàn)上消化道出血和肝性腦病等嚴(yán)重并發(fā)癥導(dǎo)致患者死亡。其中，由門靜脈高壓引起的上消化道大出血是臨床患者最主要的死亡原因。目前在臨床上，緩解門靜脈高壓主要采用脾切除門奇靜脈斷流術(shù)，減少了上消化道大出血的發(fā)生，然而，該術(shù)式對(duì)于肝儲(chǔ)備功能的改善幫助不大。肝硬化引起的肝儲(chǔ)備功能逐漸降低被認(rèn)為是不可逆轉(zhuǎn)的，目

2、前最好的治療方案是進(jìn)行肝移植。然而，供肝的日益短缺、昂貴的移植費(fèi)用和較高的技術(shù)要求限制了肝移植的普遍開(kāi)展。骨髓干細(xì)胞(Bone marow stem cells，BM-SCs)具有分化為多種功能細(xì)胞的潛能，當(dāng)其進(jìn)入肝臟后在微環(huán)境的誘導(dǎo)下可向肝細(xì)胞分化，以取代受損的肝細(xì)胞。經(jīng)過(guò)大量動(dòng)物模型及臨床研究，已經(jīng)證實(shí)其能分化為正常肝細(xì)胞并發(fā)揮功能，增加功能性肝臟體積，對(duì)改善肝臟儲(chǔ)備功能，治療肝硬化具有積極的影響。目前，自體骨髓干細(xì)胞移植治療肝硬化

3、已經(jīng)在國(guó)內(nèi)外得到廣泛應(yīng)用。
　　目的：
　　將30名符合脾切除門奇靜脈斷流術(shù)指征的肝硬化失代償期患者，隨機(jī)分為兩組，每組15人，對(duì)治療組患者應(yīng)用自體骨髓干細(xì)胞聯(lián)合脾切除門奇斷流術(shù)治療。對(duì)照組患者僅行脾切除門奇斷流術(shù)治療。觀察并比較兩組患者治療后前白蛋白(Prealbuminn，PA)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic-pyruvic transaminase，ALT)，總膽紅素(Total bilirubin，TBIL)，白蛋白

4、(Serum albumin，ALB)凝血酶原時(shí)間(Prothrombintime，PT)的變化，腹水量和肝臟體積變化情況以及Child-Pugh分級(jí)的改善情況，通過(guò)以上指標(biāo)綜合評(píng)估兩組患者肝臟儲(chǔ)備功能，探討自體骨髓干細(xì)胞聯(lián)合脾切除門奇斷流術(shù)治療相比僅行脾切除門奇斷流術(shù)在治療失代償期肝硬化上對(duì)改善肝臟儲(chǔ)備功能是否存在優(yōu)勢(shì)。
　　資料與方法：
　　經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者知情同意。30例確診為乙肝后肝硬化失代償期患者為我院肝

5、膽外科2011年1-8月收治患者，其乏力、消瘦、面色晦暗、胃腸功能紊亂和吸收不良綜合癥等肝儲(chǔ)備功能降低癥狀明顯。肝功能、血常規(guī)等檢查呈現(xiàn)出典型的肝功能減退和脾功能亢進(jìn)表現(xiàn)，胃鏡可見(jiàn)食管胃底靜脈中度或重度曲張。B超，CT等影像學(xué)檢查提示肝臟體積縮小，呈結(jié)節(jié)樣改變，門靜脈增寬，脾大，腹水。以上患者均符合《病毒性肝炎防治方案》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，具有脾切除門奇靜脈斷流術(shù)指征。治療組男11例，女4例，年齡(56±13)歲。根據(jù)Child-Pugh分級(jí)

6、，其中A級(jí)11例，B級(jí)4例。對(duì)照組男10例，女5例，年齡(59±11)歲。其中A級(jí)10例，B級(jí)5例。
　　治療組患者全麻后在髂后上棘采集骨髓血量40-80mL，用4000U肝素抗凝。將骨髓離心后去除其脂肪層，然后加入等量的DMEM培養(yǎng)液，待骨髓稀釋后將其制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞懸液中加入Percoll分離液后，以1200r/min轉(zhuǎn)速于室溫環(huán)境下離心30min，然后吸取其界面細(xì)胞層，用生理鹽水清洗后再離心三次(1500r/min)，每

7、次5min。最后用10mL生理鹽水重懸細(xì)胞，分離得單個(gè)核細(xì)胞數(shù)約為12.5×1010個(gè)，全程注意無(wú)菌操作以避免污染。在對(duì)單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行活細(xì)胞和CD34+陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)后，將細(xì)胞放入37℃，5％CO2孵箱中培養(yǎng)待用。
　　34例患者術(shù)中均可見(jiàn)肝臟體積縮小，表面散在大小不等硬化結(jié)節(jié)等肝硬化典型表現(xiàn)，可見(jiàn)脾增大，脾門血管明顯增粗，食管胃底靜脈明顯曲張等門脈高壓表現(xiàn)。對(duì)照組僅行脾切除門奇斷流術(shù)。治療組患者行脾切除門奇斷流術(shù)后經(jīng)門靜脈屬支注入

8、自體骨髓干細(xì)胞懸液。
　　檢測(cè)并比較術(shù)后1周、2周、4周兩組患者的ALT、TBIL、ALB、PT、PA、腹水量變化情況。比較術(shù)后1月兩組患者肝臟大小差異以及Child-Pugh分級(jí)情況。
　　結(jié)果：
　　1.術(shù)后第2周起，自體骨髓干細(xì)胞移植聯(lián)合脾切除門奇斷流術(shù)的患者的PT，ALT，TBIL顯著低于對(duì)照組。PA，ALB顯著高于對(duì)照組。兩組腹水量均明顯減少。術(shù)后1月CT測(cè)量患者肝臟體積大小可見(jiàn)治療組患者肝臟增生，肝臟體積顯