三氧化二砷對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)-β1因子誘導(dǎo)的大鼠肺成纖維細(xì)胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型膠原分泌的影響.pdf

1、目的：
　　 肺間質(zhì)纖維化是許多肺部疾病終末期共同的改變，死亡率高，并且缺乏有效治療手段。其發(fā)病機(jī)制尚不清楚，目前主要認(rèn)為在肺纖維化發(fā)病的起始階段大量炎性細(xì)胞被活化并向肺內(nèi)浸潤(rùn)，伴隨著多種細(xì)胞因子的釋放，形成連鎖放大性質(zhì)的瀑布效應(yīng)，激活多種細(xì)胞，誘導(dǎo)肺組織內(nèi)成纖維細(xì)胞的活化與增殖，并且分泌細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)，最終導(dǎo)致肺纖維化的形成。在這個(gè)病理過(guò)程中，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transfor

2、ming growth factor-beta1，TGF-β1)被認(rèn)為是最重要的細(xì)胞因子，它可以誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞向表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin.α-SMA)的肌成纖維細(xì)胞分化。而肺成纖維細(xì)胞膠原分泌增多造成。ECM異常沉積也被認(rèn)為是肺纖維化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其中Ⅰ、Ⅲ型膠原是主要成分，占ECM的絕大多數(shù)。減少肺成纖維細(xì)胞膠原的分泌，被認(rèn)為可能是治療肺纖維化的有效方式。我科前期研究發(fā)現(xiàn)三氧化二砷能夠誘導(dǎo)早期博

3、萊霉素致纖維化大鼠的肺組織中炎性細(xì)胞凋亡，并且降低肺纖維化大鼠肺組織中羥脯氨酸含量，減少肺組織中的膠原沉積，從而減輕肺纖維化進(jìn)展。那么三氧化二砷的作用機(jī)理究竟如何?其減輕肺纖維化的作用是否通過(guò)抑制TGF-β1誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞增殖從而減少了膠原分泌?這些問(wèn)題即是本課題研究的重點(diǎn)，擬通過(guò)探討三氧化二砷對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠肺成纖維細(xì)胞增殖與Ⅰ、Ⅲ型膠原分泌的影響，闡明三氧化二砷治療肺纖維化的部分作用機(jī)制。
　　 材料與方法：

4、>　　 分離培養(yǎng)正常健康大鼠的肺組織的成纖維細(xì)胞，取自然純化至第四代的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。采用TGF-β1對(duì)成纖維細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)，之后分別予以不同濃度的三氧化二砷進(jìn)行干預(yù)，觀察干預(yù)后12h、24h、48h的成纖維細(xì)胞增殖情況，分別與對(duì)照組的細(xì)胞進(jìn)行比較。用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，MTT計(jì)數(shù)方法觀察各組細(xì)胞的增殖情況，熒光定量PCR方法觀察各組細(xì)胞α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 (1)原

5、代離體培養(yǎng)的正常肺成纖維細(xì)胞在倒置顯微鏡下呈細(xì)長(zhǎng)梭形，排列緊密、具有方向一致性，角蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示為陰性，波形纖維蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示為陽(yáng)性，證實(shí)為成纖維細(xì)胞。(2)三氧化二砷可以抑制TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠肺成纖維細(xì)胞的增殖；三氧化二砷1uM/L和2uM/L濃度組的細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受抑制，細(xì)胞增殖抑制率最高達(dá)到50％以上(p<0.05)；肌成纖維細(xì)胞的標(biāo)志物α-SMA的mRNA表達(dá)量也隨之減少，最多可減少51.8％(p<0.05

6、)。(3)三氧化二砷能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的肺肌成纖維細(xì)胞分泌Ⅰ、Ⅲ型膠原；三氧化二砷1uM/L組和三氧化二砷2uM/L組細(xì)胞Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)量明顯減少，最多可減少50％以上(P<0.05)。三氧化二砷濃度、肌成纖維細(xì)胞的標(biāo)志物α-SMA的mRNA表達(dá)量、Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)量之間呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系。
　　 結(jié)論：
　　 三氧化二砷能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞的增殖；同時(shí)三氧化二砷能夠減少TGF-