不同濃度重組雞白細(xì)胞介素-6(rChIL-6)蛋白在雞體內(nèi)外活性研究.pdf

1、為了研究重組雞白細(xì)胞介素-6（rChIL-6）蛋白在SPF雞體內(nèi)外活性相關(guān)性，從而為開(kāi)發(fā)以rChIL-6蛋白為主要成分的基因工程免疫增強(qiáng)劑研究提供科學(xué)依據(jù)，本研究采用間接ELISA法和MTS法分別測(cè)定不同濃度的rChIL-6蛋白與抗rChIL-6單抗發(fā)生特異性免疫反應(yīng)活性以及體外促雞脾臟、外周血T淋巴細(xì)胞增殖活性；篩選出4個(gè)濃度的rChIL-6蛋白進(jìn)行體內(nèi)活性比較實(shí)驗(yàn)。將160只37日齡SPF雞隨機(jī)平均分為20組，進(jìn)行以上4個(gè)濃度的rC

2、hIL-6蛋白對(duì)傳染性法氏囊病毒（IBDV）滅活疫苗、活疫苗免疫增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)研究；通過(guò)檢測(cè)分析接種后不同時(shí)間實(shí)驗(yàn)組雞的IBDV抗體水平、不同細(xì)胞因子（ChIL-2、ChIL-4、ChIL-6、ChIFN-α、ChIFN-γ）表達(dá)水平、脾臟和外周血T淋巴細(xì)胞增殖活性、外周血T淋巴細(xì)胞亞群含量等指標(biāo)，篩選出可在雞體內(nèi)發(fā)揮好的免疫增強(qiáng)作用的rChIL-6蛋白最大稀釋度。將48只130日齡SPF雞隨機(jī)平均分為6組，進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)通過(guò)皮下注射、滴鼻點(diǎn)眼途

3、徑將rChIL-6蛋白（以上實(shí)驗(yàn)篩選出的濃度，1:25倍稀釋）與新城疫病毒（NDV）滅活疫苗、弱毒活疫苗同時(shí)接種后不同時(shí)間對(duì)雞體抗NDV抗體水平、淋巴細(xì)胞亞群含量的影響，以比較rChIL-6蛋白對(duì)NDV滅活疫苗和弱毒活疫苗免疫增強(qiáng)作用的影響，及不同接種方式對(duì)NDV弱毒活疫苗免疫增強(qiáng)作用的影響。
　　結(jié)果：rChIL-6蛋白可與抗rChIL-6單抗發(fā)生特異性免疫反應(yīng)，其蛋白相對(duì)含量約為121.57pg/mL；稀釋度≤1：212的rC

4、hIL-6蛋白具有明顯促ConA刺激的雞脾臟淋巴細(xì)胞增殖活性，其OD490值極顯著高于細(xì)胞對(duì)照（P＜0.01），而稀釋度≤1：25時(shí)，不同稀釋度的rChIL-6蛋白與原液相比差異不顯著（P＞0.05）；稀釋度≤1：211時(shí)rChIL-6蛋白具有明顯的促ConA刺激的雞外周血T淋巴細(xì)胞增殖活性，且當(dāng)稀釋度為1：27時(shí)測(cè)定的OD490值達(dá)到峰值；相對(duì)而言，rChIL-6蛋白對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞的增殖活性顯著高于外周血T淋巴細(xì)胞。與IBDV滅活疫

5、苗、弱毒活疫苗對(duì)照組相比，7 dpi~35 dpi期間，篩選出4個(gè)濃度的rChIL-6蛋白（原液、1：23稀釋、1：25稀釋、1：27稀釋）與IBDV滅活疫苗、弱毒活疫苗同時(shí)應(yīng)用后均能顯著提高IBDV抗體水平，提高ChIL-2、ChIL-4、ChIL-6、ChIFN-α和ChIFN-γ在雞體內(nèi)的表達(dá)水平，提高雞脾臟和外周血T淋巴細(xì)胞增殖活性、CD4+/CD8+比值；與PBS對(duì)照組相比，不同濃度rChIL-6蛋白對(duì)照組均能顯著提高雞體Ch

6、IL-2、ChIL-4、ChIL-6的表達(dá)水平，但對(duì)ChIFN-α、ChIFN-γ表達(dá)水平無(wú)明顯影響（P>0.05）；可顯著提高雞脾臟和外周血T淋巴細(xì)胞增殖活性、CD4+/CD8+比值；稀釋度≤1：25的rChIL-6蛋白以上各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)與原液相近，但1：27倍稀釋的rChIL-6蛋白顯著低于原液；相對(duì)而言，rChIL-6蛋白與IBDV滅活疫苗共同使用組雞的以上各項(xiàng)指標(biāo)優(yōu)于與弱毒活疫苗組共同使用組雞，rChIL-6蛋白與IBDV弱毒活疫

7、苗分開(kāi)使用組雞的以上各項(xiàng)指標(biāo)稍優(yōu)于與rChIL-6蛋白弱毒活疫苗混合使用組。與NDV滅活疫苗、弱毒活疫苗對(duì)照組相比，7 dpi~42 dpi期間，稀釋度為1：25的rChIL-6蛋白與NDV滅活疫苗、弱毒活疫苗同時(shí)應(yīng)用后均能提高NDV1~3個(gè)HI抗體滴度；7 dpi~35 dpi期間，均能顯著提高雞脾臟和外周血T淋巴細(xì)胞增殖活性。相對(duì)而言，rChIL-6蛋白與NDV滅活疫苗共同使用組雞的NDV抗體滴度、雞脾臟和外周血T淋巴細(xì)胞增殖活性等

8、指標(biāo)優(yōu)于弱毒活疫苗組；rChIL-6蛋白與NDV弱毒活疫苗分開(kāi)使用組雞的以上各項(xiàng)指標(biāo)稍優(yōu)于弱毒活疫苗組混合使用組。
　　結(jié)論：rChIL-6蛋白在體外可與抗ChIL-6單抗發(fā)生特異性免疫反應(yīng)，具有顯著的促雞脾淋巴細(xì)胞增殖活性和較弱的促PBLC增殖活性。不同濃度的rChIL-6蛋白在機(jī)體內(nèi)與IBDV、NDV滅活疫苗和弱毒活疫苗同時(shí)應(yīng)用后均可通過(guò)增強(qiáng)外周血T淋巴細(xì)胞和脾臟淋巴細(xì)胞增殖活性，提高機(jī)體Th1、Th2型細(xì)胞因子的表達(dá)水平，提