重組腺病毒介導(dǎo)表達(dá)蓖麻毒蛋白B鏈及其與A鏈聯(lián)合作用對(duì)細(xì)胞殺傷的研究.pdf

1、蓖麻毒素(RicinToxinRT)存在于大戟科植物蓖麻籽中，主要是蓖麻堿、蓖麻毒蛋白(Ricin)及過(guò)敏性物質(zhì)，Ricin是強(qiáng)細(xì)胞毒蛋白，對(duì)腫瘤細(xì)胞半數(shù)殺傷的濃度--IC60在10-12molL左右。Ridcin分子由A，B二條肽鏈構(gòu)成，通過(guò)一對(duì)二硫鍵相連。A鏈(RicinToxinAChain，RTA)是活性鏈具有毒性，能使核糖體失活，抑制蛋白質(zhì)的合成，使細(xì)胞死亡。但是單一的RTA無(wú)法進(jìn)入細(xì)胞，無(wú)毒或毒性有限；B鏈(RicinTox

2、inBChaimRTB)對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性，其功能是幫助RTA進(jìn)入細(xì)胞。脅cin應(yīng)用于臨床腫瘤治療的研究和應(yīng)用由來(lái)已久。 為了避免Ricin的高毒性，發(fā)揮它在腫瘤治療中的作用，設(shè)想將RTA和RTB分開(kāi)，將蓖麻毒蛋白B鏈基因插入El基因缺失腺病毒中，利用病毒作為載體在腫瘤灶局部表達(dá)RTB蛋白，然后再注射入RTA，由于RTA與RTB具有很強(qiáng)的親和性(0lsnesetaL.2001)，RTA將向腫瘤灶局部富集，并在RTB的幫助下進(jìn)入細(xì)胞，

3、發(fā)揮RTA的細(xì)胞毒作用，殺傷細(xì)胞。同時(shí)，殺傷的細(xì)胞會(huì)釋放RTA／RTB復(fù)合體，產(chǎn)生一定的旁觀(guān)者效應(yīng)，殺傷周?chē)?xì)胞。 為了驗(yàn)證這一設(shè)想的可行性，本研究用原核表達(dá)系統(tǒng)融合表達(dá)帶有His和Trx標(biāo)簽的RTA，分離制備了有生物活性的可溶性RTA蛋白，并且構(gòu)建了表達(dá)RTB的重組腺病毒載體，能在目的細(xì)胞中表達(dá)RTB蛋白。用表達(dá)RTB的重組病毒感染HEK293、№la、Smmc7721、HL7702等細(xì)胞，然后加入純化的RTA蛋白，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生