利多卡因、普魯卡因和布比卡因在生物樣品中的分解動力學研究.pdf

1、目的: 1 建立生物樣品中利多卡因、普魯卡因、布比卡因原體及分解產(chǎn)物的氣相色譜(GC)及氣相色譜-質譜聯(lián)用(GC/MS)定性定量分析方法； 2 建立生物樣品中利多卡因、普魯卡因和布比卡因的分解動力學研究方法； 3 研究不同存貯條件下生物樣品中利多卡因、普魯卡因和布比卡因的濃度變化規(guī)律，指導選擇最佳檢材存放條件，為局麻藥硬膜外麻醉意外死亡和中毒案件的法醫(yī)學鑒定提供實驗依據(jù)。 方法: 1 氣相色譜/氣

2、質聯(lián)用分析方法： 1.1 樣品處理：腦組織(勻漿)、血液、尿液樣品中加入內標物，經(jīng)酸、堿化處理后，乙醚萃取。 1.2 氣相色譜分析條件：DB-5毛細管柱(30m x 0.25mm x 0.25μm)，程序升溫模式：150℃(1min)→10℃·min<'-1>→280℃(2min)；檢測器為NPD，溫度300℃；進樣口空氣60KPa，氫氣2.3 KPa；載氣：N<,2> 1.5 ml·min<'-1>。 1.3

3、氣質聯(lián)用分析條件：DB-5毛細管柱(30m x 0.25mm x 0.25μm)，電子能量70ev，質量范圍：50～650，柱溫：150℃(1min)→10℃·min<'-1>→280℃(2min)；離子源溫度：200℃，傳輸線溫度：250℃，載氣：He：1.5 ml·min<'-1>。 1.4 定性定量方法：利用保留時間結合特征離子峰(氣-質聯(lián)用)定性，內標法和工作曲線法(氣相色譜)定量。 2 分解動力學研究：

4、 2.1 分組：利多卡因、普魯卡因和布比卡因實驗組犬各4只，分別按2倍極量30mg/kg、60mg/kg和10mg/kg于5分鐘內勻速注入犬蛛網(wǎng)膜下腔。 2.2 分解動力學研究：注入藥液后立即處死動物，分別采取腦組織、心血和尿液，每種樣品分三等份分別置于20℃、4℃、-20℃環(huán)境中保存，于死后不同時間點檢測各保存條件下利多卡因、普魯卡因和布比卡因的含量，winolin軟件擬合分解動力學方程，計算利多卡因、普魯卡因和布比卡因在不同

5、保存條件下(20℃、4℃、-20℃)不同樣品(腦組織、血液和尿液)中的分解半衰期。 2.3 SAS9.0重復測量設計資料方差分析法統(tǒng)計數(shù)據(jù)，對各藥的溫度之間、時間之間進行配對t檢驗，比較不同溫度對各藥的分解動力學過程有無影響。 結果: 1 氣相色譜/氣質聯(lián)用分析：利多卡因、普魯卡因、布比卡因、SKF<,525A>和各藥分解產(chǎn)物的保留時間分別為8.20、9.70、12.00、12.10和7.80、8.62、11.5

6、8min；特征離子片段分別為86、58、30；86、99、120；140、84、98;86、91、99和68、121、165；120、137、92；98、70、42。各峰形均對稱，可完全分離。腦組織、血液和尿液中利多卡因、普魯卡因和布比卡因工作曲線線性檢測范圍分別為0.5～20μg·ml<'-1>、0.5～25μg·ml<'-1>和0.5～20μg.ml<'-1>，最低檢出限0.05μg.ml<'-1>，方法回收率91±2.1％～114

7、±4.2％，RSD均小于10％。 2 利多卡因、普魯卡因和布比卡因在生物樣品中的分解動力學 2.1 分解動力學方程及參數(shù)：利多卡因、普魯卡因和布比卡因在生物樣品中的分解動力學符合一級動力學過程，可用1gC=1gCo-kt/2.303表示，式中k為一級分解速率常數(shù)。腦組織、血液和尿液中利多卡因在20℃、4℃和-20℃存儲條件下的分解半衰期t<,1/2>分別為17、30、34；27、35、35和13、14、47天；普魯卡因

8、的分解半衰期t<,1/2>分別為2、2、2;2、7、15和35、42、49天；布比卡因的分解半衰期t<,1/2>分別為33、64、72；51、71、80和17、60、81天。 2.2 各藥不同儲存條件下的含量變化趨勢本實驗研究結果顯示，20℃、4℃、-20℃保存時，腦組織、血液和尿液中利多卡因含量均在第8、48和8天顯著下降(P<0.05)；腦組織中利多卡因含量在20℃保存80天、4℃保存120天降為0μg/g，-20℃降至初始

9、值的4.2％；血液中利多卡因含量在20℃保存96天降為0μg/ml，4℃和-20℃保存120天分別降至初始值的5.0％和7.6％；尿液中利多卡因含量在20v、4℃和-20℃保存120天分別降至初始值的1.1％、4.5％、13.0％。 20℃、4℃、-20℃保存時，腦組織、血液和尿液中普魯卡因含量分別在保存第2、2、2，2、4、8和32、48、64天顯著下降(P<0.05)；腦組織、血液和尿液在-20℃保存120天中普魯卡因含量分

10、別為初始值的1.0％、1.9％和35.6％。 20℃、4℃、-20℃保存時，腦組織、血液和尿液中布比卡因含量在保存第8、16、64，4、4、8和2、4、16天顯著下降(P<0.05)；腦組織、血液和尿液在-20℃保存120天中布比卡因濃度分別為初始值的54.5％、35.5％和33.2％。 結論: 1. 建立了腦組織、血液和尿液中測定利多卡因、普魯卡因、布比卡因的GC及GC/MS分析方法，可使藥物原體和代謝產(chǎn)物完全

11、分離，該法簡便、靈敏、重現(xiàn)性好，適用于利多卡因、普魯卡因和布比卡因麻醉意外案例的快速鑒定。 2. 建立了利多卡因、普魯卡因和布比卡因在生物樣品中的分解動力學研究模型，可應用于其法醫(yī)毒理學研究。 3. 利多卡因、普魯卡因和布比卡因在各保存條件下均有分解，20℃保存時分解較快，其次為4℃，-20℃保存時分解較慢，因而麻醉意外死亡和中毒案件的法醫(yī)學鑒定中應注意冷藏或冷凍保存檢材，并盡快檢驗。 4. 利多卡因、普魯卡因、