載GDNF基因的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促周圍神經(jīng)再生的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)復(fù)合綠色熒光蛋白(GFP)定向誘導(dǎo)向神經(jīng)細(xì)胞分化及其促進(jìn)大鼠外周損傷神經(jīng)的再生。
　　方法:應(yīng)用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的貼壁特性復(fù)合連續(xù)換液法獲取原代細(xì)胞，培養(yǎng)獲取純度及活力較高、形態(tài)較為統(tǒng)一的第三代細(xì)胞，第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)經(jīng)載GDNF基因復(fù)合綠色熒光蛋白(GFP)的質(zhì)粒以脂質(zhì)體為介導(dǎo)轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)分化，記錄對(duì)比細(xì)胞活力及形態(tài)學(xué)方面的變化，通過(guò)免疫

2、熒光鑒定神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)的熒光表達(dá)確定轉(zhuǎn)染結(jié)果。鉗夾法統(tǒng)一建立坐骨神經(jīng)損傷模型，將誘導(dǎo)培養(yǎng)后形態(tài)學(xué)較為良好的細(xì)胞濃縮后植入周圍神經(jīng)再生室模型，術(shù)后定期觀察統(tǒng)計(jì)坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(SFI)、完整解剖實(shí)驗(yàn)大鼠雙側(cè)腓腸肌稱重，測(cè)量靶肌肉濕質(zhì)量率、損傷神經(jīng)再生室段解剖出神經(jīng)組織行自動(dòng)病理圖文系統(tǒng)分析神經(jīng)再生纖維、靶肌肉冰凍切片行DAPI染色觀察細(xì)胞萎縮、核凝聚狀態(tài)及形態(tài)學(xué)變化、神經(jīng)損傷再生室組織取材電鏡觀察神經(jīng)顯微結(jié)構(gòu)變化。

3、　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)分化組相關(guān)數(shù)據(jù)均較未經(jīng)誘導(dǎo)對(duì)照組顯著，這充分肯定了GDNF基因的確切作用，經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)活躍分化良好，神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)特異表達(dá)，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)組坐骨神經(jīng)掃描電鏡下超微結(jié)構(gòu)再生更加明顯，細(xì)胞核染色可見(jiàn)實(shí)驗(yàn)組能明顯抑制靶肌肉的萎縮。
　　結(jié)論:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDN