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文檔簡介
1、背景與目的:神經(jīng)酰胺(Ceramide,Cer)作為細胞內(nèi)第二信使分子,廣泛參與細胞增殖、分化、生長抑制和凋亡等多種細胞活動,是重要的促凋亡因子,參與非酒精性脂肪病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的發(fā)生發(fā)展。環(huán)氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)是前列腺素合成限速酶,由各種刺激因子誘導產(chǎn)生,參與炎癥、纖維化和腫瘤等病理過程,可促進肝細胞凋亡,加重肝纖維化。因此,本研
2、究從神經(jīng)酰胺這一新視角探討COX-2促進肝細胞凋亡參與NAFLD形成的機制,為研究NAFLD機制及防治提供新思路和尋找新的藥物治療靶點。
方法:48只雄性SD大鼠適應性培養(yǎng)1周后,完全隨機分為4組:正常對照組、NAFLD模型組、空質(zhì)粒組、COX-2shRNA組,每組12只。除對照組外,飼喂高脂飼料進行造模,空質(zhì)粒組和COX-2shRNA組大鼠于造模第一周開始,分別尾靜脈注射空質(zhì)粒載體和腺病毒(PBS稀釋),劑量為1×109pf
3、u/只,每周1次,共12周。蘇木精-伊紅染色法(Hematoxylin-eosin staining,HE stain)檢測大鼠肝臟脂肪變性、纖維化程度和炎癥活動度;油紅O染色檢測肝細胞脂肪變性程度;Masson染色檢測大鼠肝臟膠原面積;實時熒光定量PCR(Real Time-PCR,RT-PCR)檢測肝組織中COX-2及α-SMAmRNA表達水平;TUNEL染色檢測大鼠肝細胞凋亡程度;高效液相色譜法(High performance
4、liquid chromatography,HPLC)檢測肝臟神經(jīng)酰胺水平。
結果:
1.COX-2shRNA改善NAFLD大鼠肝臟脂肪變性、膠原沉積、炎性浸潤及纖維化程度。
2.COX-2shRNA組大鼠肝臟組織中COX-2mRNA表達水平低于NAFLD模型組及空質(zhì)粒組(P<0.001)。
3.COX-2shRNA組大鼠肝臟組織中α-SMAmRNA表達水平低于NAFLD模型組及空質(zhì)粒組(P<0.
5、001)。
4.正常組、NAFLD模型、空質(zhì)粒組及COX-2 shRNA組大鼠肝組織細胞凋亡指數(shù)分別為(1.80±0.94)%、(6.47±2.53)%、(4.93±1.87)%、(3.93±1.67)%。COX-2shRNA組凋亡指數(shù)低于NAFLD模型組及空質(zhì)粒組(P<0.001)。
5.COX-2 shRNA組大鼠肝組織神經(jīng)酰胺水平低于NAFLD模型組及空質(zhì)粒組(P<0.001)。
結論:
1
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