抑制COX-2對(duì)非酒精性脂肪肝細(xì)胞凋亡與衰老的影響.pdf

1、目的：觀察COX-2抑制劑尼美舒利對(duì)高脂誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)大鼠細(xì)胞凋亡與衰老的影響。
　　方法：36只SD大鼠按體重隨機(jī)均分為對(duì)照組、NAFLD模型組、尼美舒利組。所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1W后，除對(duì)照組予普通飲食喂養(yǎng)外，其余2組皆飼喂高脂飼料進(jìn)行造模，共12W。尼美舒利組大鼠于造模第1W開(kāi)始灌胃給予尼美舒利，劑量為6mg/kg/d。11W末時(shí)隨機(jī)從

2、對(duì)照組和NAFLD模型組各抽取2只大鼠，留取肝組織行Masson膠原染色病理檢查鑒定成模。余下的各組大鼠皆按原方法飼養(yǎng)至12W末。第12W末處死動(dòng)物，處死前隔夜禁食并稱重。每只大鼠經(jīng)下腔靜脈取血，離心分離血清，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine Transaminase,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate Aminotransferase，AST)、甘油三酯(Triglyceride，TG)、總膽固醇(total

3、cholesterol，TC)；取各組肝組織行油紅 O染色、蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）和Masson膠原染色觀察并分析大鼠肝臟組織病理學(xué)的改變；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）檢測(cè)大鼠肝臟COX-2和α-SMA mRNA的表達(dá)情況；TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）染色法檢測(cè)大鼠肝臟

4、細(xì)胞凋亡；衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶染色法（senescence-associatedβ-galactosidase，SA-β-Gal）檢測(cè)大鼠肝臟細(xì)胞衰老。
　　結(jié)果：1.11W末時(shí)Masson膠原染色結(jié)果顯示：對(duì)照組大鼠肝細(xì)胞呈紅色，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰；NAFLD模型組大鼠肝組織血管壁及匯管區(qū)可見(jiàn)纖維，細(xì)胞間質(zhì)未見(jiàn)明顯膠原沉積，肝細(xì)胞脂肪變≥5％。
　　2.造模結(jié)束時(shí)（12W末）與對(duì)照組相比，NAFLD模型組大鼠的血清ALT、T

5、C水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與NAFLD模型組相比，尼美舒利組大鼠血清AST、TC、TG水平均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.據(jù)油紅O染色所示，對(duì)照組、NAFLD模型組、尼美舒利組大鼠肝組織脂變面積分別為（0.00±0.00）%、（41.32±12.61）%、（23.40±11.43）%。尼美舒利組大鼠肝組織脂變面積明顯低于NAFLD模型組(P＜0.01)。
　　4.qPCR檢測(cè)結(jié)果：

6、尼美舒利組大鼠肝臟組織中α-SMA表達(dá)水平較對(duì)照組和NAFLD模型組均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。NAFLD模型組大鼠肝臟組織中COX-2表達(dá)水平較正常組表達(dá)增高(P＜0.05)；尼美舒利組COX-2表達(dá)水平較NAFLD模型組顯著降低(P＜0.01)。
　　5.TUNNEL染色并計(jì)算細(xì)胞凋亡指數(shù)結(jié)果：對(duì)照組、NAFLD模型組、尼美舒利組大鼠肝組織細(xì)胞凋亡指數(shù)分別為（1.80±0.94）%、（6.47±2.53）%、（3

7、.00±1.20）%。NAFLD模型組較對(duì)照組相比細(xì)胞凋亡指數(shù)升高，差異具有顯著性(P＜0.01)；尼美舒利組較NAFLD模型組相比減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；尼美舒利組與對(duì)照組相比，細(xì)胞凋亡指數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　6.SA-β-Gal染色并計(jì)算細(xì)胞衰老指數(shù)結(jié)果：對(duì)照組、NAFLD模型、尼美舒利組大鼠肝組織細(xì)胞衰老指數(shù)分別為（14.00±8.41）%、（0.00±0.00）%、（32.20±19.1

8、9）%。NAFLD模型組較對(duì)照組相比細(xì)胞衰老指數(shù)減少，差異有顯著性(P＜0.01)；尼美舒利組較模型組細(xì)胞衰老指數(shù)增加，差異有顯著性(P＜0.01)；尼美舒利組與對(duì)照組相比，細(xì)胞衰老指數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：1.尼美舒利對(duì)高脂誘導(dǎo)的大鼠NAFLD的發(fā)生發(fā)展有控制作用，在改善其血脂代謝、肝功能及肝臟病理學(xué)改變方面效果明顯。
　　2.尼美舒利對(duì)實(shí)驗(yàn)性NAFLD大鼠的保護(hù)作用可能與其下調(diào)COX-2基因表達(dá)，