人源NTR1穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的構(gòu)建及其拮抗劑的篩選.pdf

1、神經(jīng)降壓素受體-1（neurotensin receptor-1, NTR1）屬于G蛋白偶聯(lián)受體（G-proteincoupled receptor, GPCR）A家族的成員，具有七次跨膜的受體結(jié)構(gòu)域。NTR1在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起著重要的作用，和多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，參與了乳腺癌，非小細(xì)胞肺癌，前列腺癌，胰腺癌等多種惡性腫瘤的生長(zhǎng)、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。神經(jīng)降壓素（Neurotensin, NT）是內(nèi)源性多肽，由十三個(gè)氨基酸殘基組成，主

2、要分布在腦和胃腸道，與多種中樞和外周的調(diào)節(jié)作用有關(guān)，因?yàn)槲挥谏窠?jīng)組織又具有降血壓的作用，故命名為神經(jīng)降壓素。
　　NT屬于NTR1的天然配體，當(dāng)受體NTR1識(shí)別配體NT后會(huì)通過(guò)Gq蛋白介導(dǎo)的信號(hào)通路，增加細(xì)胞內(nèi)鈣離子的濃度，對(duì)于NTR1拮抗劑的篩選是重要的依據(jù)，NT配體可以作為陽(yáng)性對(duì)照。SR48692是已知的對(duì)NTR1具有較好拮抗作用的小分子化合物，可以作為陰性對(duì)照用于小分子拮抗劑的篩選。
　　鼠源NTR1蛋白的三維晶體結(jié)構(gòu)

3、于2012年被成功解析，這使得基于受體結(jié)構(gòu)的虛擬篩選成為可能。本課題首先采用基于配體的藥效團(tuán)模型和分子指紋的方法對(duì)課題組前期得到的針對(duì)NTR1靶標(biāo)的10000個(gè)小分子的數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行虛擬篩選，得到候選化合物；然后構(gòu)建了CHO/NTR1穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系；使用多功能酶標(biāo)儀Flexstation3，對(duì)候選化合物進(jìn)行細(xì)胞水平的鈣流檢測(cè)，測(cè)試其生物活性，最終得到了四個(gè)具有較好拮抗活性的化合物?？梢詫?duì)這4個(gè)化合物進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化改造使其成為先導(dǎo)化合物，用于與