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文檔簡介
1、分子生物學的根本目的是從微觀角度對紛繁復雜生物世界作出科學解釋。五十多年來,圍繞著基因的復制與表達這個分子生物學的核心課題,研究人員在中心法則的框架下不斷豐富著我們對這一生命基本現(xiàn)象的認識。在這一過程很重要的突破是對各種類型的非編碼RNA的鑒定與功能研究。核仁小分子RNA(snoRNA)是目前已鑒定的非編碼RNA中的最大的類群。從古細菌到哺乳動物的幾乎所有的生物類群中都已鑒定出snoRNA這類分子。目前,研究已經(jīng)證實這類分子具有參與核糖
2、體RNA的生物合成以及指導包括核糖體RNA,核小分子RNA,轉(zhuǎn)運RNA在內(nèi)的一系列RNA分子的轉(zhuǎn)錄后修飾等生物學功能。另外,在哺乳動物中還鑒定出一百多種功能未知的snoRNA分子(orphan snoRNA),有證據(jù)顯示這些分子將在其它生理過程中起到重要的調(diào)控功能。因此,對新的saoRNA進行鑒定及對其功能進行分析對于加深我們對基因的表達與調(diào)控的認識有重要意義。本論文采用計算機分析與分子生物學實驗相結(jié)合的方法,對人類的snoRNA進行了
3、研究。 本論文應用SnoSeeker軟件包對人類基因組進行分析,從中篩選出19種候選SnoRNA分子,這包括11種box C/D snoRNA分子和8種box H/ACA snoRNA分子。本論文對這19種snoRNA分子進行了功能分析,結(jié)果指出其中分別有6種box C/D snoRNA和5種box H/ACA snoRNA也許具有指導核糖體RNA和核小分子RNA轉(zhuǎn)錄后修飾的生物學功能。另外的8種snoRNA則屬于功能尚未能確定
4、的類群。本論文以northern雜交,逆轉(zhuǎn)錄反應和cDNA測序等實驗方法對這19種候選snoRNA分子在Hela細胞的表達情況進行了研究。結(jié)果確定了六種在Hela細胞中穩(wěn)定表達snoRNA,分別命名為SNORD119,SNORD124,SNORA82,SNORA83.SNORA85和SNORA86。它們屬于人類細胞中新鑒定的snoRNA分子。在這六種分子中,SNORD119的功能是指導28S-A4560堿基的2’-O-核糖甲基化修飾:S
5、NORA82和SNORA83則分別指導28S-449l和18S-1367位點的假尿嘧啶化修飾:其余三種是新的orphan snoRNA。 本論文還對表現(xiàn)出組織專一性的SNORD121分子的生物學功能進行了研究。結(jié)果指出,該分子序列中有一段長度為12個核苷酸與28S核糖體RNA互補的反義序列,預測它可以指導28S-G4607位點的2’-O-核糖甲基化修飾。但dNTP濃度梯度實驗結(jié)果顯示該位點的修飾并沒有組織專一性。這說明該分子也許
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