填飼對(duì)鵝肝膽固醇合成相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、鵝肥肝是世界三大美食之一。填飼是獲得鵝肥肝的重要技術(shù)手段。經(jīng)過填飼后，鵝肝中含有大量對(duì)人體健康有益的不飽和脂肪酸、卵磷脂、微量元素等，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。以往的研究多關(guān)注于肝臟脂肪酸的研究，而關(guān)于膽固醇方面的文獻(xiàn)報(bào)道甚少，也沒有關(guān)于填飼對(duì)鵝肝臟膽固醇含量影響的報(bào)道。HMGCS1基因參與調(diào)控HMG-CoA合成酶的生成，該酶是肝臟膽固醇生物合成中的關(guān)鍵酶，其功能是將乙酰CoA和乙酰乙酰CoA縮合為HMG-CoA。該基因與膽固醇的合成密切相關(guān)

2、。
　　本試驗(yàn)旨在獲得鵝HMGCS1基因的cDNA序列，觀察該基因與填飼鵝肝臟生成膽固醇的相關(guān)性。運(yùn)用RACE方法擴(kuò)增目的基因的cDNA序列，進(jìn)行生物信息學(xué)分析。對(duì)填飼鵝進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和組織切片觀察，同時(shí)對(duì)朗德鵝的體重、肝重、肝重指數(shù)等屠宰性狀進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。并選用膽固醇試劑盒測(cè)定鵝肝中膽固醇的含量。在分子生物技術(shù)方面，利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)并分析HMGCS1基因在各組織中mRNA的表達(dá)，同時(shí)比較填飼后各組織HMGCS1基因表達(dá)

3、的變化。在體外試驗(yàn)方面，通過對(duì)半原位灌注法的改進(jìn)，分離培養(yǎng)鵝肝細(xì)胞，觀察細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化，探究各類脂肪酸、葡萄糖和胰島素對(duì)鵝肝細(xì)胞脂肪沉積的影響。研究結(jié)果如下:
　　1.本試驗(yàn)成功克隆了HMGCS1基因，獲得其mRNA序列，2947 bp，其中開放閱讀框包含了1569個(gè)堿基，編碼522個(gè)氨基酸，基因序列已提交GenBank，登錄號(hào)為KF425515。該基因在進(jìn)化過程中高度保守，序列與鴨最為接近，并屬于同一支系。
　　2.熒光定量

4、結(jié)果顯示HMGCS1基因特異性的在肝臟中表達(dá)，其他組織表達(dá)較低(P＜0.01)。試驗(yàn)結(jié)果表明，朗德鵝填飼高能日糧后該基因的表達(dá)顯著下降(P＜0.01)，推測(cè)該基因與膽固醇的合成有關(guān)。該結(jié)果可用于填飼鵝的育種和鵝肥肝的生產(chǎn)。
　　3.填飼后朗德鵝的體重、肝重、肝重指數(shù)與對(duì)照組相比均顯著增加(P＜0.05)，并且形成明顯的脂肪肝，肝細(xì)胞有明顯腫大和脂肪沉積，但均未出現(xiàn)炎癥反應(yīng)。另外，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)朗德鵝血清中膽固醇含量雖有極顯著升高(P＜0

5、.01)，但是肝臟中膽固醇含量卻極顯著降低(P＜0.01)。
　　4.利用改良后的半原位灌注法成功分離培養(yǎng)了活性較高的鵝原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞。原代肝細(xì)胞在24孔板中生長(zhǎng)良好，48 h至72 h為細(xì)胞處理的最佳時(shí)間段。隨著鵝肝細(xì)胞的增殖，細(xì)胞內(nèi)的脂滴數(shù)量會(huì)逐漸增多，預(yù)示著鵝肝細(xì)胞本身的脂肪代謝能力較強(qiáng)，間接佐證了鵝填飼效率高的原因。同時(shí)，不飽和脂肪酸以及胰島素在一定濃度下可以促進(jìn)肝細(xì)胞中脂肪的合成。多不飽和脂肪酸在一定濃度下也會(huì)促進(jìn)HMG