豬抵抗素、脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體基因的克隆和分子特征.pdf

1、脂肪組織不僅是儲(chǔ)藏及供給能量的場(chǎng)所，而且還是一個(gè)代謝十分活躍，功能復(fù)雜的內(nèi)分泌器官，它能分泌許多脂肪細(xì)胞因子，包括腫瘤壞死因子-α(TNFα),瘦素(leptin)、白介素—6(IL-6)、脂聯(lián)素和抵抗素等。這些脂肪細(xì)胞因子通過內(nèi)分泌或旁分泌方式對(duì)全身各器官系統(tǒng)功能具有重要調(diào)節(jié)作用，特別是參與調(diào)節(jié)與肥胖相關(guān)的胰島素抵抗和葡萄糖代謝紊亂。胰島素抵抗也即胰島素生理作用減弱，是多數(shù)2型糖尿病的主要的病理生理缺陷，往往與肥胖密切相關(guān)。

2、 抵抗素和脂聯(lián)素是近來發(fā)現(xiàn)的兩個(gè)最為典型的脂肪細(xì)胞因子。Resistin的重要生理作用就是將肥胖與胰島素抵抗聯(lián)系起來。對(duì)resistin進(jìn)一步深入研究對(duì)于預(yù)防、檢測(cè)和治療2型糖尿病具有重要指導(dǎo)意義。Adiponectin由脂肪細(xì)胞分泌后進(jìn)入血液，以多種形式在血液中循環(huán)。脂聯(lián)素球狀區(qū)在體內(nèi)獨(dú)立存在，與完整的脂聯(lián)素功能相似。脂聯(lián)素能夠促進(jìn)肌肉脂肪酸氧化、降低血漿甘油三酯、通過增強(qiáng)胰島素的敏感性而促進(jìn)葡萄糖代謝。另外，脂聯(lián)素在抗心血管疾病方面

3、也發(fā)揮著重要作用。 本文以梅山豬為研究對(duì)象，以半定量RT-PCR、Western Bloting和輻射雜種細(xì)胞板技術(shù)等方法，對(duì)抵抗素、脂聯(lián)素以及脂聯(lián)素受體進(jìn)行了基因克隆、表達(dá)及染色體定位等研究，取得了如下結(jié)果： 1.利用cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)的方法得到了豬resistin cDNA的5'和3'末端，通過拼接得到全長(zhǎng)535bp的resistin cDNA序列；利用PCR的方法得到了resistin的全長(zhǎng)DNA

4、序列，并對(duì)其基因組結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。結(jié)果顯示豬resistin cDNA序列含330bp的開放閱讀框，編碼109aa，分子量為12kDa，推導(dǎo)的氨基酸序列與人resistin氨基酸序列具有75.2％的同源性。豬resistin基因由四個(gè)外顯子組成，與人resistin基因具有相同的外顯子結(jié)構(gòu)，而與小鼠resistin基因結(jié)構(gòu)差異較大。 2.以豬的心、肝、脾、血液白細(xì)胞、肺等十二個(gè)組織樣品作為研究材料，利用半定量RT-PCR的方法研

5、究了豬resistin基因在各組織的表達(dá)譜和表達(dá)規(guī)律，結(jié)果表明該基因在所有被檢測(cè)的樣品中均有表達(dá)，但在血液白細(xì)胞中表達(dá)量最高，這與人resistin的研究結(jié)果一致，而與嚙齒動(dòng)物resistin的結(jié)果完全不同(主要在白色脂肪組織中特異表達(dá))。這表明豬resistin具有與人resistin相似的表達(dá)規(guī)律和功能。 3.制備了兔抗豬resistin多克隆抗血清，并利用該抗血清檢測(cè)了豬resistin蛋白質(zhì)在血液中的表達(dá)情況，west

6、ern blotting結(jié)果表明豬resistin在血液中以二聚體和三聚體的形式循環(huán)，表明豬resistin可能主要以這兩種形式發(fā)揮功能。 4.依據(jù)NCBI已公布的豬脂聯(lián)素、部分脂聯(lián)素受體1和2的mRNA序列，以及人的這三個(gè)基因的mRNA和基因組序列，設(shè)計(jì)引物得到了豬脂聯(lián)素的第二個(gè)內(nèi)含子，脂聯(lián)素受體1的第5個(gè)內(nèi)含子、脂聯(lián)素受體2的第5個(gè)內(nèi)含子以及脂聯(lián)素受體1基因的部分基因組序列。 5.根據(jù)獲得的豬脂聯(lián)素、部分脂聯(lián)素受

7、體1和2的基因片段序列設(shè)計(jì)引物，利用輻射雜種板技術(shù)對(duì)這三個(gè)基因進(jìn)行了染色體精細(xì)定位。結(jié)果顯示這三個(gè)基因分別定位于13、10和5號(hào)染色體上，分別與人的這三個(gè)基因處于保守向線群。 6.以豬的心、肝、脾、血液白細(xì)胞、肺等十二個(gè)組織樣品作為研究材料，利用半定量RT-PCR的方法研究了豬脂聯(lián)素、脂聯(lián)素受體1和2基因的組織表達(dá)，結(jié)果表明豬脂聯(lián)素在脂肪組織中特異高效表達(dá)；脂聯(lián)素受體1和2除了腦組織以外，在其他所有被檢測(cè)的組織中均有表達(dá)，但脂