2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  通過將攜帶自分泌運(yùn)動(dòng)因子(AMF)基因的成肌細(xì)胞自體移植到神經(jīng)植入術(shù)后的大鼠腓腸肌,觀察神經(jīng)肌肉功能的恢復(fù)情況,從而驗(yàn)證作為腫瘤相關(guān)因子,AMF能否促進(jìn)終板再生和神經(jīng)肌肉功能的修復(fù);為AMF的應(yīng)用性研究和神經(jīng)植入術(shù)后神經(jīng)肌肉功能的改善提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
  方法:
  1、原代培養(yǎng)大鼠成肌細(xì)胞,鑒定后純化并擴(kuò)增;
  2、構(gòu)建攜帶AMF及eGFP基因的慢病毒載體,經(jīng)鑒定后,轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的成肌細(xì)胞,并對后者

2、表達(dá)的AMF進(jìn)行生物學(xué)活性鑒定;
  3、建立大鼠腓腸肌失神經(jīng)支配及神經(jīng)植入術(shù)模型,并分為A組(未經(jīng)轉(zhuǎn)染的成肌細(xì)胞)、B組(攜帶AMF基因和eGFP基因的成肌細(xì)胞)、和C組(空白載體轉(zhuǎn)染的僅攜帶eGFP基因的成肌細(xì)胞);于神經(jīng)植入術(shù)后第0天、第7天,將每只大鼠對應(yīng)的自體成肌細(xì)胞,注射移植于腓腸肌內(nèi);
  4、成肌細(xì)胞移植后第8、16、24周,腓腸肌冰凍切片觀察成肌細(xì)胞的存活情況;測定脛神經(jīng)功能指數(shù)(TFI)和神經(jīng)電生理指標(biāo),

3、后者包括復(fù)合肌肉動(dòng)作電位(CMAP)的峰峰值(PPV)、曲線下面積(AUC),并計(jì)算神經(jīng)傳導(dǎo)速度(NCV);24周后通過AchE染色計(jì)數(shù)單位面積內(nèi)終板數(shù)量,并觀察腓腸肌組織形態(tài)學(xué)改變。
  結(jié)果:
  1、經(jīng)過21天的原代培養(yǎng)及純化,1cm3肌肉可獲得純度為98.0%的成肌細(xì)胞,平均5.6×106個(gè);
  2、構(gòu)建了攜帶AMF和eGFP基因的慢病毒載體并成功轉(zhuǎn)染成肌細(xì)胞,最佳轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)(MOI)為100。Transwel

4、l實(shí)驗(yàn)證實(shí):受AMF刺激后48小時(shí)內(nèi)穿過聚碳酸酯膜的NIH-3T3細(xì)胞為159±23.5個(gè)/視野,較對照組(94.6±36.1個(gè)/視野)明顯增多(P<0.05),說明轉(zhuǎn)染后的成肌細(xì)胞能表達(dá)有活性的AMF;
  3、成功建立大鼠腓腸肌失神經(jīng)支配及神經(jīng)植入術(shù)模型,成肌細(xì)胞移植后第8、16、24周均在腓腸肌中觀察到成肌細(xì)胞存活;
  4、移植后8、16、24周,TFI(A組:-69.3±11.8,-46.5±8.0,-33.6±9

5、.1:B組:-57.5±9.1,-36.8±7.1,-25.2±6.4;C組:-67.7±8.2,-49.7±9.2,-34.2±8.7)、PPV(A組:8.5±2.3 mV、29.5±7.4%,12.4±2.4 mV、40.4±7.1%,18.6±2.9 mV、62.5±9.3%;B組:11.8±1.9 mV、39.0±5.2%,15.0±1.6 mV、39.0±5.2%,22.1±1.5 mV、39.0+±.2%;C組:8.7±1.

6、5 mV、30.0±5.4%,11.5±1.8 mV、39.2±6.2%,18.1±1.7 mV、60.9±5.4%)、AUC(A組:10.5±2.1 mV*ms、33.0±5.9%,13.7±2.5 mV*ms、41.2±6.8%,19.0±3.4 mV*ms、60.5±8.6%;B組:13.6±2.1 mV*ms、40.9±7.3%,16.8±3.1 mV*ms、50.7±9.3%,23.0±1.7 mV*ms、72.3±6.7%;

7、C組:9.6±2.6mV*ms、31.3±8.1%,13.7±2.9 mV*ms、42.4±9.9%,18.2±2.1 mV*ms、59.4±6.7%)測定和終板計(jì)數(shù)(A組:90.1±15.1/切片;B組:120.7±18.6/切片;C組:86±16.4/切片)顯示:B組明顯高于A、C組(P<0.01),說明攜帶AMF基因的成肌細(xì)胞自體移植,能明顯促進(jìn)神經(jīng)肌肉功能的恢復(fù);而A、C組之間無顯著差異(P>0.05),說明eGFP空白載體的轉(zhuǎn)

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