殼聚糖接枝雙醛淀粉固定化黑曲霉木聚糖酶的研究.pdf

1、不同的酶由于其結(jié)構(gòu)和特性都不相同，因此選擇的載體和固定化方法也各有不同。為了所研究的酶能夠很好的適應(yīng)所選的的固定化載體和采用的固定化方法，載體的選擇仍然是固定化酶首要解決的問題。對(duì)于木聚糖酶來說，由于底物的一些限制，固定化方法上多采用吸附和載體結(jié)合法。本文在此基礎(chǔ)上選取了兩種無機(jī)插層材料水滑石和磷酸鋯以及天然材料殼聚糖通過接枝雙醛淀粉這些載體，篩選出對(duì)黑曲霉A-25來源的木聚糖酶固定化效果較好的載體，并對(duì)其固定化工藝進(jìn)行了優(yōu)化，進(jìn)一步研

2、究了固定化酶的酶學(xué)特性。研究結(jié)果如下： 1. 尋找合適的載體是固定化研究的重要課題之一。通過對(duì)所選的幾種載體的固定化試驗(yàn)，篩選出了固定化木聚糖酶效果較好的殼聚糖接枝雙醛淀粉。然后對(duì)殼聚糖接枝雙醛淀粉材料固定化木聚糖酶的條件進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明：3.0g殼聚糖球添加氧化度為95％的雙醛淀粉1.0g在70℃條件下處理16h，然后在此條件下，1.0g的載體在添加0.2mo/1 pH5.6醋酸緩沖液、溫度30℃，加酶量為4ml的條件下進(jìn)

3、行8h固定化處理效果好，獲得的固定化酶回收率可達(dá)63％。 2. 與游離酶相比，殼聚糖固定化酶和殼聚糖接枝雙醛淀粉固定化酶，其最適pH沒有變化，均在4.6，pH的穩(wěn)定性交化不大，在pH4.6-8.6之間固定化酶穩(wěn)定性很好，總體殼聚糖接枝雙醛淀粉固定化酶的pH穩(wěn)定性好于殼聚糖直接吸附固定化酶。酶的最適溫度提高了，殼聚糖接枝雙醛淀粉固定化酶和殼聚糖固定化酶的最適溫度分別由游離酶的50℃提高到55℃和60℃，溫度穩(wěn)定性都明顯增加了，殼聚

4、糖接枝雙醛淀粉以及殼聚糖固定化酶在50℃下半衰期分別是游離酶的2.35倍和1.51倍。同時(shí)固定化酶在4℃冰箱內(nèi)的貯存穩(wěn)定性比游離酶要好，貯存76天后固定化酶殘余活力還保持在85％，游離酶僅為60％。供試的所有離子對(duì)殼聚糖固定化酶和殼聚糖接枝雙醛淀粉固定化酶的影響有些區(qū)別，K+、Mg2+和EDTA，對(duì)殼聚糖固定化酶的影響是部分失活的，但是對(duì)殼聚糖接枝雙醛淀粉固定化酶是稍微激活的：除Ag+以外，其它離子對(duì)固定化酶都沒有激活作用。殼聚糖和殼聚