白介素-23在原發(fā)性免疫性血小板減少癥患者中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：
　　明確白介素-23（interleukin-23，IL-23）在原發(fā)性免疫性血小板減少癥(primaryimmune thrombocytopenia，ITP)患者中的表達(dá)情況，初步探討IL-23對ITP患者中Th17細(xì)胞亞群的調(diào)控機(jī)制，并探討地塞米松（dexamethasone，DXM）對ITP患者中IL-23表達(dá)的影響及其可能的機(jī)制。
　　方法：
　　分別收集ITP患者和健康對照組的外周血標(biāo)本，以EDTA

2、抗凝，離心后收集血漿;剩余血細(xì)胞標(biāo)本利用Ficoll密度梯度離心法分離獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，分離得到的PBMC和血漿均分裝到若干EP管中保存以備不同實(shí)驗(yàn)需求。抽提PBMC中總RNA，并反轉(zhuǎn)錄為cDNA，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(TaqMan-MGB法)檢測IL-23p19、IL-12p40、IL-12p35、IL-23R、IL-12Rβ1及IL-12Rβ2的m

3、RNA表達(dá)水平。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(SYBR Green法)檢測IL-17A、IL-17F及RORC的mRNA相對表達(dá)量。利用ELISA法檢測血漿中IL-23和IL-17蛋白的表達(dá)量，western blot法檢測IL-23受體的表達(dá)量，流式細(xì)胞術(shù)檢測ITP患者Th17細(xì)胞亞群百分比，全自動血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測納入研究對象的外周血血小板計(jì)數(shù)(platelet count，PLT)。分析ITP患者血漿中IL-23水平與Th17細(xì)胞亞群百分

4、比，IL-17以及PLT的相關(guān)性;體外應(yīng)用不同濃度的rhIL-23和培養(yǎng)基刺激ITP患者PBMC，檢測IL-6、IL-17、IL-21蛋白水平，及RORC、STATs mRNA的表達(dá)量，并分析STATs的磷酸化水平。隨訪15例新診斷的ITP患者，利用ELISA方法，檢測經(jīng)高劑量DXM（40mg/day×4天）治療后，血漿中IL-23和IL-17的變化情況，在體外應(yīng)用不同濃度的DXM處理這組患者PBMC，檢測IL-23的變化趨勢，p38M

5、APKmRNA的表達(dá)及其磷酸化水平，進(jìn)一步研究加入p38MAPK的特異性激活劑(anisomycin)后，DXM對IL-23表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　與健康對照組相比，ITP患者中IL-23p19、p40亞基，IL-23R和IL-23Rβ1的表達(dá)均顯著增高，IL-12p35亞基和IL-12Rβ2也有增高，但其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ITP患者中IL-17A、IL-17F及調(diào)控Th17細(xì)胞發(fā)育的特異性轉(zhuǎn)錄因子RORC mRNA的

6、表達(dá)量亦顯著增高。ITP患者血漿中IL-23和IL-17的表達(dá)量顯著上升，且在PLT≤20×109/L的患者中增高得更為顯著。與健康對照組相比，ITP患者外周血IL-23受體的表達(dá)及Th17細(xì)胞亞群百分比均顯著增高。ITP患者組血漿IL-23的表達(dá)量與外周血Th17細(xì)胞亞群百分比以及IL-17的表達(dá)量呈顯著正相關(guān)，而與PLT呈顯著負(fù)相關(guān)。與培養(yǎng)基刺激組相比，體外20ng/ml和10ng/ml的rhIL-23刺激組培養(yǎng)上清液中IL-6、I

7、L-17、IL-21蛋白水平和RORC mRNA的表達(dá)量均顯著上升，且IL-17、IL-21蛋白水平和RORC mRNA在20ng/ml rhIL-23刺激組中的增高更為顯著，STATs信號通路mRNA表達(dá)在rhIL-23的刺激后均有上調(diào)的趨勢，但STAT3的增高幅度最大，并且其磷酸化水平顯著增高。通過隨訪15例新診斷的ITP患者，發(fā)現(xiàn)在經(jīng)高劑量DXM治療后，其血漿中IL-23和IL-17的表達(dá)均顯著下降，在體外用不同濃度DXM處理該組

8、患者PBMC后發(fā)現(xiàn)，隨著DXM濃度增高，IL-23的表達(dá)呈下降趨勢，且p38 MAPKmRNA的表達(dá)及其磷酸化水平亦呈下降趨勢，呈現(xiàn)接近劑量依賴性的模式，進(jìn)一步加入anisomycin后，DXM對IL-23的抑制作用顯著減弱。
　　結(jié)論：
　　ITP患者中IL-23 mRNA和蛋白質(zhì)含量均顯著增高，且與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，IL-23在ITP的疾病進(jìn)展中具有重要作用。ITP患者中高表達(dá)的1L-23可能通過介導(dǎo)STAT3的活化并激