他汀類藥物對缺血性腦血管病患者體液免疫指標(biāo)的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、研究背景及目的：
　　他汀類藥物，即3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，它作用于內(nèi)源性膽固醇生物合成的限速酶——HMG-CoA還原酶，從而抑制膽固醇合成中間產(chǎn)物甲羥戊酸的合成，通過該途徑抑制內(nèi)源性膽固醇的生物合成，他汀類藥物因其調(diào)節(jié)血脂、降低內(nèi)源性膽固醇作用而被廣泛應(yīng)用于血脂調(diào)節(jié)及臨床動脈硬化性疾病的預(yù)防和治療。除了血脂調(diào)節(jié)功能以外，目前，他汀類藥物的免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用正逐漸受到關(guān)注。他汀類藥物的免疫

2、調(diào)節(jié)功能主要通過抑制甲羥戊酸(mevanolate，MAV)的生物合成，減少下游焦磷酸法尼酯(farnesylpyrophosphateFPP)和櫳牛兒基櫳牛兒基焦磷酸(geranyl geranyl pyrophos phate，GGPP)的產(chǎn)生，進而抑制小GTP結(jié)合蛋白的活化而實現(xiàn)的:FPP和GGPP是內(nèi)源性膽固醇生物合成的兩個中間產(chǎn)物，在特異性酶的催化下，能與Ras、Rho家族等小G蛋白共價結(jié)合發(fā)生異戊二烯化，發(fā)生異戊二烯化的小G

3、蛋白活化并參與細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，傳遞細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)從而引起下游多種效應(yīng)。他汀類藥物作用于HMG-CoA還原酶，減少了中間產(chǎn)物的形成，使得細胞信號分子活化受阻導(dǎo)致下游多種成分的改變進而調(diào)節(jié)免疫活動。該藥物作用可影響免疫系統(tǒng)中的一系列成分，干擾細胞免疫及體液免疫的多個環(huán)節(jié)，目前已知他汀類藥物能對Th1/Th2細胞因子分泌、調(diào)節(jié)性T細胞、樹突狀細胞、NK細胞、NKT細胞等多種免疫成分產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用，并影響細胞凋亡和增殖、抗原提呈、淋巴細胞歸巢

4、等免疫環(huán)節(jié)，他汀類藥物的免疫調(diào)節(jié)作用已用于實驗室動物模型及臨床多種疾病的治療。目前，他汀類藥物對B細胞的調(diào)節(jié)作用尚不明確，本研究的目的在于通過檢測缺血性腦血管病患者服用他汀類藥物前后外周血中與體液免疫相關(guān)的指標(biāo)變化，探討他汀類藥物在缺血性腦血管疾病患者中對B細胞免疫的調(diào)節(jié)作用。在體液免疫中，記憶B細胞是二次免疫中的主要效應(yīng)細胞，在接受二次抗原刺激后，它能迅速分化為漿細胞產(chǎn)生大量抗體，IgG是再次免疫中生成的主要抗體類型，在二次免疫中發(fā)揮

5、重要作用。IL-21近幾年來因其在B細胞生成和活化中發(fā)揮重要作用而受到關(guān)注，IL-21可誘導(dǎo)所有B細胞亞群分化為Ig分泌細胞，分泌大量IgM、IgG和IgA，同時已有研究證實IL-21可輔助B細胞活化并產(chǎn)生抗體，同時可介導(dǎo)抗體亞型轉(zhuǎn)換，BAFF是新的腫瘤壞死因子家族成員，它能刺激B細胞生長及活化。這些免疫分子與體液免疫息息相關(guān)，同時它們之間又存在相互作用和聯(lián)系，構(gòu)成免疫網(wǎng)絡(luò)，對這些分子的相關(guān)研究也相對匱乏，因此，我們選擇記憶B細胞（CD

6、19+CD27+細胞）、IL-21、BAFF及IgG作為檢測指標(biāo)，探討他汀類藥物對B細胞免疫的體內(nèi)調(diào)節(jié)作用。
　　缺血性腦血管病是神經(jīng)內(nèi)科常見多發(fā)疾病，包括TIA、腦梗死、以及高脂血癥、腦血管狹窄等引起的腦動脈供血不足，也是臨床服用他汀類藥物最主要的患者群。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)他汀類藥物對SLE、MS患者的免疫系統(tǒng)及EAE、EAN和EAMG等免疫動物模型均存在免疫調(diào)節(jié)作用，但這些研究大多是在免疫激活狀態(tài)下探究他汀類藥物的免疫調(diào)節(jié)作用。而臨

7、床大多數(shù)服用他汀類藥物的患者并未處于免疫激活狀態(tài)，另一方面，目前臨床使用他汀類藥物主要關(guān)注它的血脂調(diào)節(jié)以及抗動脈硬化作用，對于他汀類藥物的免疫調(diào)節(jié)作用對于普通患者的免疫系統(tǒng)會產(chǎn)生什么樣的影響尚不清楚，因此，我們選擇缺血性腦血管病患者這一臨床他汀類藥物的主要使用群體作為研究對象，探究他汀類藥物在相對非激活免疫狀態(tài)下的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　研究對象：
　　山東省千佛山醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科2013年6月-12月缺血性腦血管病患者。根據(jù)嚴(yán)格的

8、入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)進行篩選。
　　研究方法：
　　(1)患者血液標(biāo)本的采集:于早上8:00-10:00局部皮膚消毒后采集患者空腹肘靜脈血2-3ml，加入無菌EDTA抗凝采血管，標(biāo)本在采集后24h內(nèi)上機流式檢測memoryB細胞（CD19+CD27+細胞），CD19+CD27-細胞，CD19+細胞;
　　(2)另同法取肘靜脈血5ml，加入無菌促凝采血管，離心分離血清后于-30℃凍存?zhèn)溆?，用于ELISA檢測IL-21，BA

9、FF，免疫比濁法檢測血清總IgG;
　　(3)給予患者他汀類藥物口服，分別為瑞舒伐他?。啥ǎ?0mg(n=13)，阿托伐他汀（立普妥）10mg(n=3)，阿托伐他汀（阿樂）10mg(n=1)，每日一次，晚飯后服用，服藥治療時間為20～34天。
　　(4)口服他汀類藥物三周后再次采集患者外周肘靜脈血液標(biāo)本，EDTA抗凝血標(biāo)本用于流式細胞檢測memoryB細胞（CD19+CD27+細胞），CD19+CD27-細胞，CD19+細

10、胞。促凝血3000r/min離心10min，分離血清放置于-30℃保存，待所有標(biāo)本留齊后進行成批檢測，用于ELISA檢測IL-21，BAFF，免疫比濁法檢測血清總IgG。
　　統(tǒng)計學(xué)處理:數(shù)據(jù)分析采用SPSS11.9統(tǒng)計軟件，計量資料以（平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，計量資料比較使用配對t檢驗。數(shù)據(jù)結(jié)果使用GRAPHPADPRISMv5軟件作圖。
　　研究結(jié)果：
　　1.缺血性腦血管病患者服用他汀類藥物后流式檢測外周血中記憶B