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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
通過(guò)觀察抑制前扣帶皮層NR2B受體對(duì)CCI大鼠突觸蛋白PSD-95與Homer1b/c表達(dá)影響,探討NR2B受體在神經(jīng)病理性疼痛的作用及其可能機(jī)制。
方法:
第一部分:觀察CCI模型大鼠機(jī)械縮足反射閾值(MWT)和熱縮足反射潛伏期(TWL)的變化。8只大鼠隨機(jī)分為2組(n=4):Sham組(假手術(shù)組)、CCI組(CCI模型組),CCI組行左側(cè)坐骨神經(jīng)結(jié)扎,Sham組僅暴露左側(cè)坐骨神經(jīng)但不結(jié)扎。分別測(cè)
2、定CCI建立前、建立后1d、2d、3d、5d、7d后MWT和TWL值。
第二部分:觀察CCI大鼠前扣帶皮層(ACC) NR2B受體、突觸蛋白PSD-95和Homer1b/c表達(dá)量的變化。8只大鼠隨機(jī)分為2組(n=4):Sham組、CCI組,在CCI模型建立后7d,采用Western blotting法分別檢測(cè)大鼠CCI結(jié)扎側(cè)(同側(cè))與對(duì)側(cè)ACC區(qū)域NR2B受體、突觸蛋白PSD-95和Homer1b/c表達(dá)量的變化。
3、第三部分:觀察CCI大鼠ACC小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞活化情況及NR2B受體的定位情況。8只大鼠隨機(jī)分為2組(n=4):Sham組、CCI組,在CCI模型建立后7d,采用免疫熒光方法分別檢測(cè)大鼠同側(cè)與對(duì)側(cè)ACC小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化情況及NR2B受體在小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元的表達(dá)與定位。
第四部分:觀察CCI大鼠ACC微量注射NR2B受體抑制劑Ro25-6981對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的影響。16只大鼠隨機(jī)分為4組(
4、n=4):Sham組、CCI組、DMSO組、Ro組。DMSO組、Ro組大鼠CCI后第5d、6d、7d ACC分別注入DMSO(0.5μL/側(cè))或Ro25-6981[0.5μL(2.5μg/μL)/側(cè)]。每組大鼠在術(shù)前1d、術(shù)后3d、術(shù)后第5d、6d、7d給藥2h后測(cè)定MWT和TWL值。
第五部分:觀察CCI大鼠ACC注射Ro25-6981后突觸蛋白PSD-95、Homer1-b/c表達(dá)量的影響。16只大鼠隨機(jī)分為4組(n=4)
5、:Sham組、CCI組、DMSO組、Ro組。DMSO組、Ro組大鼠CCI后第5d、6d、7d ACC分別注入DMSO(0.5μL/側(cè))或Ro25-6981[0.5μL(2.5μg/μL)/側(cè)],第7d注藥后2h取材ACC,Westem blotting法檢測(cè)ACC區(qū)域突觸蛋白PSD-95、Homer1b/c的表達(dá)量。采用免疫共沉淀法(Co-Ip)檢測(cè)Homer1b/c與NR2B及PSD-95的相互作用。
結(jié)果:
1.
6、與Sham組大鼠相比,CCI組1d、2d、3d、5d、7d MWT和TWL值均明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
2.CCI模型建立后7d,大鼠ACC同側(cè)與對(duì)側(cè)NR2B受體,突觸蛋白PSD-95、Homer1 b/c表達(dá)量均明顯增加,與Sham組大鼠相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
3.CCI模型建立后7d,大鼠ACC同側(cè)與對(duì)側(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞活化數(shù)量明顯增加,與Sham組大鼠相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P
7、<0.01)。免疫熒光共染發(fā)現(xiàn)NR2B受體僅定位于神經(jīng)元上。
4.大鼠CCI后第5d、6d、7d連續(xù)雙側(cè)ACC微量注射NR2B受體抑制劑Ro25-6981后可明顯提高大鼠MWT和TWL。與CCI組和DMSO組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
5.大鼠雙側(cè)ACC微量注射Ro25-6981可顯著下調(diào)ACC突觸蛋白PSD-95表達(dá)量,與CCI組和DMSO組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。而對(duì)Homer1 b/c表達(dá)
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