生骨再造丸對兔激素性股骨頭壞死干預(yù)機(jī)制的實驗研究.pdf

1、目的：觀察生骨再造丸對兔激素性股骨頭壞死的血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）及受體fms樣酪氨酸激酶（VEGFR-1/FLT-1）表達(dá)的影響，探討其對激素性股骨頭壞死（SANFH）的干預(yù)機(jī)制。
　　方法：取80只日本大耳白兔，隨機(jī)抽取10只作為空白組（A組）。其余70只采用小劑量內(nèi)毒素（LPS）聯(lián)合大劑量激素的方法建立SANFH模型，造模過程死亡共計11只，造模后兩周，隨機(jī)抽取9只，應(yīng)用空氣注射栓塞法處死并取出股骨頭標(biāo)本制作病理切片，經(jīng)

2、HE染色處理在高倍（×400）光學(xué)顯微鏡下觀察股骨頭組織的病理變化，證實早期SANFH造模成功后，將剩余的SANFH模型日本大耳白兔再次隨機(jī)分為5組：模型組（B組）、生骨再造丸低劑量組（C組）、生骨再造丸中劑量組（D組）、生骨再造丸高劑量組（E組）以及髓芯減壓組（F組），每組10只，依照實驗設(shè)計進(jìn)行藥物灌胃以及手術(shù)處理，實驗期間觀察記錄各組日本大耳白兔的行為變化，分別在藥物灌胃以及髓芯減壓處理后的第4周及第8周末,經(jīng)髖關(guān)節(jié)X線顯影后，采

3、用空氣注射栓塞法將其處死，收集雙側(cè)股骨頭，左側(cè)股骨頭標(biāo)本冷凍保存，采用實時熒光定量PCR技術(shù)（RT-PCR）檢測分析股骨頭組織的中VEGF及其受體FLT-1基因表達(dá)量的變化。右側(cè)股骨頭標(biāo)本放入4％多聚甲醛中用于制備組織切片，一方面行HE染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察各組組織切片的病理變化及空骨陷窩率；另一方面將組織切片應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)處理并檢測VEGF以及受體FLT-1的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　?。?）日本大耳白兔的行為學(xué)變化：

4、造模前日本大耳白兔的精神狀況良好，飲食正常，毛發(fā)有光澤，四肢關(guān)節(jié)活動正常。造模后日本大耳白兔精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、食量下降，大便稀薄，后肢肌力下降，關(guān)節(jié)活動稍差，部分日本大耳白兔出現(xiàn)跛行等早期SANFH癥狀。經(jīng)生骨再造丸藥物以及手術(shù)治療后，同一時間點下，C、D、E及F組日本大耳白兔后肢肌力、關(guān)節(jié)活動度以及跛行較B組有所改善，但仍較A組減弱，E和F組癥狀改善更加明顯；隨著時間的推移，C、D、E及F組的早期SANFH癥狀癥狀均有不同程度的恢復(fù)

5、，E和F組恢復(fù)更加顯著。
　?。?）X線表現(xiàn)：A組股骨頭形態(tài)完整，關(guān)節(jié)間隙正常，關(guān)節(jié)面光滑,骨密度均勻；B組關(guān)節(jié)間隙狹窄，骨密度不均，軟骨下見點灶樣囊性變；同一取材時間條件下，與B組相比C、D、E以及F組的點灶樣囊性變范圍有所減小，E和F組減小更顯著；第8周時C、D、E及F各組較第4周時關(guān)節(jié)間隙得到改善，點灶樣囊性變范圍明顯減少。E、F組較C、D組減少更加顯著。
　?。?）HE染色：A組未見異常病理變化；B、C、D、E及F組

6、均有骨細(xì)胞空骨陷窩出現(xiàn)；同一取材時間條件下，與B組相比，C、D、E及F組的骨細(xì)胞空骨陷窩數(shù)量不同程度減少， F組較C、D、E組空骨陷窩數(shù)量減少最不明顯，E組空骨陷窩數(shù)量減少最顯著(P＜0.05)；隨著時間推移，第8周C、D、E及F組骨細(xì)胞空骨陷窩數(shù)量較第4周各組有不同程度減少， F組變化不明顯，E組減少最為顯著(P＜0.05)。
　?。?）免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測：VEGF的陽性表達(dá)：A組可見少量陽性顆粒；B組陽性顆粒略有增加；同一時

7、間點下，C、D、E及F組陽性顆粒較B組多，F(xiàn)組陽性顆粒數(shù)量增加的最不明顯，E組陽性顆粒增加最為顯著(P＜0.05)；隨著時間推移，第8周C、D、E及F組陽性顆粒較4周各組也存在不同程度增加，F(xiàn)組變化最不明顯，E組增加最顯著(P＜0.05)。FLT-1陽性表達(dá)的檢測：A組可見少量陽性顆粒；B組陽性顆粒略有增加；同一取材時間條件下C、D、E組以及F組陽性顆粒較B組多，F(xiàn)組增加最不明顯，E組陽性顆粒增加最為顯著，特別是在壞死區(qū)(P＜0.05)

8、；隨著時間推移，第8周C、D、E以及F組陽性顆粒較4周各組也存在不同程度增加，F(xiàn)組變化最不明顯，E組增加最顯著(P＜0.05)。
　　（5）實時熒光定量PCR技術(shù)（RT-PCR）檢測：VEGF基因表達(dá)：同一取材時間條件下，與A、B組比較，C、D、E、F各組VEGF基因表達(dá)量增多(P＜0.05)；組間比較，E組較C、D、F組VEGF基因表達(dá)量明顯增多(P＜0.05)。FLT-1基因表達(dá)：同一取材時間條件下，與A、B組比較，C、D、E

9、、F各組FLT-1基因表達(dá)量增多(P＜0.05)；組間比較，E組較C、D、F組FLT-1基因表達(dá)量明顯增多(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　?。?）本實驗證明大劑量激素可以成功誘導(dǎo)兔SANFH的發(fā)生。
　?。?）生骨再造丸對兔早期SANFH療效明確，改善了兔早期SANFH的癥狀，促進(jìn)壞死骨組織的愈合，與髓芯減壓相比療效更持久，髓芯減壓的近期效果較好。
　?。?）VEGF及其受體FLT-1與SANFH的病變過程密切