操縱細(xì)胞CaM水平對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草脯氨酸代謝的影響.pdf

1、本論文以實(shí)驗(yàn)室建立的誘導(dǎo)表達(dá)細(xì)胞CaM的轉(zhuǎn)基因煙草體系為實(shí)驗(yàn)材料，研究了細(xì)胞CaM水平與脯氨酸代謝之間的關(guān)系。研究工作包括以下幾個(gè)方面： 1、良好誘導(dǎo)表達(dá)細(xì)胞核CaM轉(zhuǎn)基因煙草株系的篩選　　利用改進(jìn)的磷酸二酯酶法測(cè)定26株誘導(dǎo)表達(dá)細(xì)胞核CaM的T2系列轉(zhuǎn)基因煙草的CaM活性，從中篩選出了四個(gè)能良好誘導(dǎo)表達(dá)的轉(zhuǎn)基因煙草株系(T2.1、T2.25、T2.19和T2.34)；隨后進(jìn)一步研究了Tc誘導(dǎo)轉(zhuǎn)基因煙草幼苗48小時(shí)以及葉圓片4

2、8小時(shí)過(guò)程中CaM活性的動(dòng)態(tài)變化。 2、操縱CaM水平對(duì)正常生長(zhǎng)條件下轉(zhuǎn)基因煙草幼苗脯氨酸代謝的影響 以第一部分檢測(cè)到的良好誘導(dǎo)表達(dá)細(xì)胞核CaM的轉(zhuǎn)基因煙草T2.1、T2.25和誘導(dǎo)表達(dá)細(xì)胞質(zhì)CaM的轉(zhuǎn)基因煙草T1.1幼苗為材料，研究正常生長(zhǎng)條件下CaM水平變化和脯氨酸代謝的聯(lián)系。 3、操縱CaM水平對(duì)滲透脅迫下轉(zhuǎn)基因煙草葉圓片脯氨酸代謝的影響　　用90天大的上述轉(zhuǎn)基因煙草株系葉圓片研究了滲透脅迫(5％PEG6

3、000)下CaM水平變化對(duì)脯氨酸代謝的影響。結(jié)果表明：滲透脅迫下，隨著處理時(shí)間延長(zhǎng)，四種葉圓片材料(無(wú)Tc誘導(dǎo))的脯氨酸含量迅速上升，96小時(shí)時(shí)脯氨酸含量比正常生長(zhǎng)條件下高出約5倍；而Tc誘導(dǎo)可顯著增強(qiáng)三個(gè)誘導(dǎo)表達(dá)細(xì)胞CaM的轉(zhuǎn)基因煙草株系(T2.1、T2.25、T1.1)在滲透脅迫下積累脯氨酸的能力。滲透脅迫下CaM對(duì)脯氨酸代謝的作用機(jī)理與正常生長(zhǎng)條下有所不同。CaM水平上調(diào)不僅增強(qiáng)了谷氨酸途徑在脯氨酸合成中的貢獻(xiàn)，而且活化了脯氨酸合