亞硝酸鹽暴露致海馬損傷和不孕效應(yīng)的研究.pdf

1、哺乳動物的海馬位于腦顳葉內(nèi)，是組成中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，在日常學(xué)習(xí)和記憶形成等生理過程中起到重要作用。亞硝酸鹽作為食品添加劑，人們在日常生活接觸的機率較高，并且，亞硝酸鹽作為小分子物質(zhì)，可透過胎盤屏障，會對胎兒產(chǎn)生影響?；诤ｑR重要的生理功能，我們對孕期亞硝酸鹽暴露是否會對仔鼠海馬造成損傷進行了研究。同時，在建模的過程中，通過實驗手段探討了亞硝酸鹽的不孕效應(yīng)。
　　目的：①探討孕期亞硝酸鹽暴露對仔鼠海馬損傷的作用；②探討亞硝酸鹽的

2、不孕效應(yīng)。
　　方法：①孕期亞硝酸鹽暴露模型的建立：將孕鼠分為對照組（生理鹽水）、低劑量亞硝酸鹽組（60 mg/kg）和高劑量亞硝酸鹽組（120 mg/kg）。收集P0（postnatal day0）、P7（postnatal day7）、P14（postnatal day14）、P30（postnatal day30）各年齡點仔鼠大腦，用于免疫組織熒光染色、彗星實驗、Western blotting蛋白半定量分析，以對海馬損傷進

3、行研究；②雌鼠亞硝酸鹽暴露模型的建立：將雌鼠也分為對照組、低劑量亞硝酸鹽組、高劑量亞硝酸鹽組，然后對亞硝酸鹽暴露后雌鼠的不孕率進行統(tǒng)計；收集對照組和暴露組卵巢，用HE染色法觀察卵巢內(nèi)部結(jié)構(gòu)及各級卵泡數(shù)目的變化；用TUNEL試劑盒和Western blotting蛋白半定量分析對卵泡內(nèi)顆粒細胞凋亡進行檢測。
　　結(jié)果：①孕期亞硝酸鹽暴露對仔鼠海馬損傷的影響：不論是暴露組還是對照組，仔鼠齒狀回增殖的神經(jīng)干細胞數(shù)目均隨著年齡的增長逐漸減

4、少；在 P0、P7、P14和P30年齡點，暴露組仔鼠增殖的神經(jīng)干細胞的數(shù)量明顯比對照組少，且具有劑量依賴性（P<0.05，n=96），為了鑒別這種抑制作用是否具有選擇性，我們對P0仔鼠室管膜下區(qū)神經(jīng)干細胞的增殖情況進行了觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)暴露組室管膜下區(qū)的神經(jīng)干細胞增殖較對照組也減少，同樣具有劑量依賴性（P<0.05）；暴露組仔鼠發(fā)生了氧化應(yīng)激且門區(qū)凋亡細胞的數(shù)目比對照組多，具有劑量依賴性（P<0.05）；彗星實驗結(jié)果顯示：暴露組P0仔鼠海

5、馬細胞的彗尾比對照組長，具有劑量依賴性(P<0.01)；與對照組P0仔鼠相比，暴露組仔鼠海馬組織內(nèi)Caspase8和NF-κB蛋白的表達量較高（P<0.05）；②亞硝酸鹽暴露的不孕效應(yīng)：亞硝酸鹽暴露可致不孕且具有劑量依賴性(P<0.05，n=66)；亞硝酸鹽暴露可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)、可使卵泡內(nèi)顆粒細胞凋亡增加（P<0.01，n=20）。
　　結(jié)論：①孕期亞硝酸鹽暴露可通過誘導(dǎo)氧化應(yīng)激、抑制神經(jīng)干細胞增殖、促進細胞凋亡而對仔鼠