LFA-1的缺失對(duì)腫瘤肺轉(zhuǎn)移的作用研究.pdf

1、腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移的過(guò)程一直困擾著科學(xué)家們，腫瘤通過(guò)血道進(jìn)入肺部，形成肺部的腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程，一直是研究的熱點(diǎn)。LFA-1是表達(dá)在白細(xì)胞上的整合素家族的一員，它對(duì)于白細(xì)胞粘附血管內(nèi)皮和抗原遞呈細(xì)胞起著關(guān)鍵性的作用。研究發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞上的LFA-1和腫瘤靶細(xì)胞的ICAM-1的結(jié)合，細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞將可以粘附在腫瘤靶細(xì)胞上進(jìn)行殺傷，監(jiān)視腫瘤的發(fā)生發(fā)展。但是未有報(bào)道，腫瘤細(xì)胞在轉(zhuǎn)移至肺部的過(guò)程中LFA-1的缺失了會(huì)造成怎樣的結(jié)果。為了研究LFA-1基因的

2、缺失會(huì)怎樣影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展，利用敲除 LFA-1基因小鼠作為實(shí)驗(yàn)組，用C57背景鼠作為對(duì)照組。
　　探究在生理?xiàng)l件下實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠的血常規(guī)，其中實(shí)驗(yàn)組的淋巴細(xì)胞的數(shù)目上調(diào)了3倍，中性粒細(xì)胞有上調(diào)的趨勢(shì)。鏡下探究它們肺部組織結(jié)構(gòu)，實(shí)驗(yàn)組的肺間隔減小且 CD45RO蛋白標(biāo)記的白細(xì)胞表達(dá)顯著性的上調(diào)。提示我們，白細(xì)胞數(shù)目的改變和肺部組織結(jié)構(gòu)的改變可能夠影響腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。
　　為此，采用B16F10小鼠黑色素瘤細(xì)胞系，構(gòu)建

3、經(jīng)典的小鼠尾靜脈注射腫瘤細(xì)胞，20天后得到腫瘤在肺部轉(zhuǎn)移的荷瘤疾病模型。結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組小鼠的肺部腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)目增多，同時(shí)其生存率也顯著性下降。觀察荷瘤后腫瘤轉(zhuǎn)移的病理進(jìn)程，第5和第10天的兩組小鼠的肺部腫瘤的數(shù)目和大小，在大體觀察和鏡下觀察的結(jié)果都沒(méi)有出現(xiàn)顯著性的差異；第15天時(shí)，實(shí)驗(yàn)組小鼠的肺部在大體下觀察肺部腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)目顯著性的增多，且腫瘤體積增大；鏡下觀察，腫瘤細(xì)胞惡性程度高，出現(xiàn)了侵襲的現(xiàn)象。檢測(cè)肺部組織的免疫組化Ki67增殖蛋

4、白的結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組的腫瘤細(xì)胞在每個(gè)進(jìn)程點(diǎn)上增殖比率都顯著性的上調(diào)。在荷瘤進(jìn)程的第15天時(shí)，實(shí)驗(yàn)組腫瘤中CD31血管標(biāo)記物和CD68巨噬細(xì)胞標(biāo)記蛋白都顯著性的高表達(dá)；同時(shí)觀察腫瘤中侵潤(rùn)相關(guān)的MMP2蛋白和MMP9蛋白的免疫組化染色都顯著性的上調(diào)。結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果和LFA-1在白細(xì)胞上的表達(dá)提示我們，可能實(shí)驗(yàn)組小鼠是改變了腫瘤免疫應(yīng)答和肺部組織的腫瘤微環(huán)境造成的腫瘤轉(zhuǎn)移的進(jìn)程加快。
　　因此，探究在荷瘤的第15天時(shí)小鼠的血液、脾臟和肺部腫瘤

5、中免疫細(xì)胞的結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組小鼠的脾臟中F4/80+的細(xì)胞比率顯著性的上調(diào)；腫瘤組織中CD8+T細(xì)胞的比率有顯著性的下降趨勢(shì)；同時(shí)腫瘤部位里分泌蛋白IL-17A和IFN-γ的表達(dá)有顯著性的上調(diào)；提示實(shí)驗(yàn)組小鼠的免疫的監(jiān)視和殺傷的下降使得腫瘤進(jìn)程在實(shí)驗(yàn)組中加快。研究肺部腫瘤微環(huán)境時(shí)，IL-2、IL-10、IL-12、IL-1β和TGF-β等炎癥因子mRNA的表達(dá)都顯著性的上調(diào)；其中，IL-1β上調(diào)30多倍最為顯著，提示我們可能是主要影響因子。

6、檢測(cè)得到實(shí)驗(yàn)組的血清中IL-1β顯著性的上調(diào)了2倍；能夠促進(jìn)腫瘤克隆形成和貼壁能力的增強(qiáng)。檢測(cè)得到IL-1β蛋白能促進(jìn)小鼠黑色素瘤細(xì)胞的侵襲和遷移，加入了anti-IL-1β蛋白后，逆轉(zhuǎn)了這一結(jié)果。依據(jù)文獻(xiàn)，IL-1β通過(guò)上調(diào)了腫瘤細(xì)胞的p-p38和p-cjun的上調(diào)也得到了證實(shí)。
　　本文以研究缺失 LFA-1基因小鼠和腫瘤細(xì)胞尾靜脈注射肺部轉(zhuǎn)移模型為研究體系。闡明了生理?xiàng)l件下，缺失 LFA-1基因后的小鼠會(huì)造成肺部白細(xì)胞的數(shù)目