酪絲纈肽對腫瘤轉移的治療作用及其機制探討.pdf

1、目的：觀察三肽化合物酪絲纈肽(Tyroservatide,YSV)對腫瘤轉移的治療作用，并初步探討其可能的作用機制。 方法： 1．建立C57BL/6小鼠黑色素瘤B16-F10人工肺轉移模型，觀察YSV對B16-F10人工肺轉移的抑制作用，計算小鼠肺轉移瘤灶數(shù)。 2．建立裸鼠人卵巢癌SKOV-3腹腔轉移瘤模型，觀察YSV對SKOV-3腹腔轉移的抑制作用，計算SKOV-3腹腔轉移裸鼠的生存時間，計算裸鼠腹腔內(nèi)轉移結節(jié)

2、數(shù)。 3．建立裸鼠人結腸癌HT-29和SW620脾移植后肝轉移模型，觀察YSV對HT-29和SW620細胞肝轉移的抑制作用，計算肝指數(shù)(肝重/體重)；同時觀察YSV對HT-29和SW620 腫瘤脾移植瘤生長的抑制作用，計算脾指數(shù)(脾重/體重)。 4．建立小鼠黑色素瘤B16細胞和人結腸癌HT-29細胞小鼠皮下移植瘤模型，觀察YSV對腫瘤細胞在動物體內(nèi)增殖的抑制作用。 5．應用MTT法觀察YSV對體外培養(yǎng)的小鼠黑色素

3、瘤B16-F10細胞、人卵巢癌SKOV-3細胞、人結腸癌HT-29和SW620細胞增殖的抑制作用。 6．應用MTT法觀察YSV對體外培養(yǎng)的B16-F10 細胞、SKOV-3 細胞、HT-29和SW620細胞與Matrigel膠粘附能力的影響。應用Transwell小室實驗模型觀察YSV對B16-F10細胞、SKOV-3細胞、HT-29和SW620細胞侵襲能力的影響。 7．應用免疫組化方法觀察YSV對B16-F10細胞和B

4、16-F10人工肺轉移模型中腫瘤組織上ICAM-1的蛋白表達的影響。應用免疫印跡的方法、實時熒光定量PCR技術，分別觀察YSV對B16-F10細胞ICAM-1蛋白表達水平和mRNA水平的影響。 8．應用酶譜分析的方法，觀察YSV對SKOV-3、HT-29和SW620細胞的MMP-2、MMP-9蛋白活性的影響；應用免疫印跡技術觀察SKOV-3、HT-29和SW620細胞及其體內(nèi)腫瘤轉移組織中MMP-2 和 MMP-9蛋白表達水平的

5、影響；用實時熒光定量PCR觀察YSV對SKOV-3、HT-29和SW620細胞及其體內(nèi)腫瘤轉移組織中MMP-2和MMP-9 mRNA水平的影響。 結果： 1.YSV(640μg/kg/d)可以顯著抑制小鼠黑色素瘤B16-F10肺轉移灶的形成，抑制率達62.21％。病理結果發(fā)現(xiàn)，YSV給藥組與生理鹽水組相比轉移灶腫瘤組織面積較小，可見片狀壞死。 2.YSV(640μg/kg/d、320μg/kg/d)可以顯著延長人

6、卵巢癌SKOV-3腹腔轉移瘤裸鼠生存時間，生命延長率最高為32.27％；可以顯著抑制SKOV-3腹腔轉移結節(jié)數(shù)，最高抑制率為52.93％。 3.YSV(640μg/kg/d、320μg/kg/d)可以顯著抑制人結腸癌HT-29和SW620細胞的肝轉移，同時抑制脾原發(fā)腫瘤的生長。 4.YSV(640μg/kg/d、320μg/kg/d、160μg/kg/d)可以顯著抑制黑色素瘤B16小鼠移植瘤的生長，最高抑制率為54.32

7、％。YSV(640μg/kg/d、320μg/kg/d)可以顯著抑制人結腸癌HT-29裸鼠移植瘤的生長，最高抑制率為45.67％。 5.YSV可以顯著抑制體外培養(yǎng)的小鼠黑色素瘤B16-F10、人卵巢癌SKOV-3、人腸癌HT-29和SW620細胞的增殖，其最高抑制率分別可達50.13％、42.7％、64-32％、63.28％。 6.YSV可以顯著抑制小鼠黑色素瘤B16-F10、人卵巢癌SKOV-3、人結腸癌HT-29和S

8、W620細胞在體外與Matrigel膠的粘附，其最高抑制率分別可達41.08％、30.87％、38.14％、47.06％；可以顯著抑制小鼠黑色素瘤B16-F10、人卵巢癌SKOV-3、人結腸癌 HT-29和SW620細胞的體外侵襲能力，其最高抑制率分別可達41.52％、54.55％、62.82％、46.25％。 7.YSV可以顯著抑制B16-F10細胞及其人工肺轉移模型中腫瘤組織上ICAM-1蛋白的表達，顯著抑制小鼠黑色素瘤B1

9、6-F10細胞ICAM-1 mRNA水平。 8．YSV可以顯著抑制人卵巢癌 SKOV-3、人結腸癌 HT-29和SW620細胞的MMP-2、MMP-9的蛋白活性；可以顯著抑制SKOV-3、HT-29和SW620細胞及其體內(nèi)腫瘤轉移組織中MMP-2和MMP-9蛋白表達及mRNA水平。 結論：YSV下調ICAM-1、MMP-2和MMP-9 mRNA及蛋白表達水平，抑制腫瘤細胞的粘附、侵襲、增殖，從而抑制黑色素瘤的肺轉移、卵巢